Abstrakt
Dvourozměrná imunoelektroforéza (dle Clarka a Freemana)
kombinuje dvě techniky: klasickou elektroforézu a elektroimunodifúzi. Na gelu
(agarosa, polyakrylamid) se nejprve provede elektroforéza bílkovin na
jednotlivé frakce, poté se neobarvený proužek gelu stane startem
elektroimunodifúze v prostředí gelu obsahujícího polyvalentní antisérum,
tato elektroimunodifúze probíhá ve směru kolmém na gel se separovanými
bílkovinami. Vznikají píky nebo oblouky, jejichž výška nebo plocha je úměrná
koncentraci příslušné bílkoviny. Identifikace frakcí se je obdobná jako u
Laurellovy “raketkové” techniky. Porovnání se standardem hledané bílkoviny však
probíhá na odděleném elektroforeogramu formou přídavku standardu ke vzorku.
Také tato technika má řadu dalších variant. Úvodní elektroforéza může být
nahrazena izoelektrickou fokusací. Dvoujrozměrná imunoelektroforéza dle Krolla
(tandémová technika) umožňuje současnou analýzu vzorku a srovnávacího
standardu.
Text
Dvourozměrná imunoelektroforéza (dle Clarka a Freemana)
kombinuje dvě techniky: klasickou elektroforézu a elektroimunodifúzi.
|
|
Na
gelu (agarosa, polyakrylamid) se nejprve provede elektroforéza bílkovin na
jednotlivé frakce, poté se neobarvený proužek gelu stane startem
elektroimunodifúze v prostředí gelu obsahujícího polyvalentní antisérum,
tato elektroimunodifúze probíhá ve směru kolmém na gel se separovanými
bílkovinami. |
Vznikají píky nebo oblouky, jejichž výška nebo plocha je
úměrná koncentraci příslušné bílkoviny. Identifikace frakcí se je obdobná jako
u Laurellovy “raketkové” techniky. Porovnání se standardem hledané bílkoviny
však probíhá na odděleném elektroforeogramu formou přídavku standardu ke
vzorku.
|
|
|
Také tato technika má řadu dalších variant. Úvodní
elektroforéza může být nahrazena izoelektrickou fokusací. Dvoujrozměrná
imunoelektroforéza dle Krolla (tandémová technika) umožňuje současnou analýzu
vzorku a srovnávacího standardu.
Autorské poznámky
Jaroslava Vávrová
.