OSN-SAbstraktOSN-E

Rychlý kvalitativní imunochemický test na průkaz přítomnosti buprenorfinu v moči, v koncentraci větší než cca 10 µg/l.

Test je určen pro akutní klinické případy, kdy umožní zvolit adekvátní terapii. Není vhodný pro soudně lékařské a forenzní potřeby, pro které by výsledek testu musel být potvrzen vhodnou kvantitativní a specifickou metodou založenou například na principu GC/MS.

 

OSN-SSeznam souvisejících dokumentůOSN-E

 

OSN-SKódy, názvy, definice a terminologieOSN-E

Synonyma: Buprenorfin hydrochlorid
                   často je požadavek uveden jako název léku s obsahem buprenorfinu (Subutex, Subuxon,…)
 
Systematický název: (2S)-2-[(-)-(5R,6R,7R,14S)-9α-cyclopropylmethyl-4,5-epoxy-6,14-ethanomorphinan-7-yl]-3-
                                    hydroxy-6-methoxy-3,3-dimethylbutan-2-ol
                                    Pozn.: Tento složitý systematický název zachycuje vzorec, jehož základem je struktura
                                                morfinu obohacená několika substituenty.

Sumární vzorec: C29H41NO4

Molární hmotnost: 467,64 g/mol

NČLP: 15126 Buprenorfin průkaz (U; přítomnost [ - ] *)

Seznam zdravotních výkonů VZP:

Název zdravotního výkonu

Číslo výkonu

Počet bodů

Psychotropní látky imunochemicky jednotlivě

99151

428

Drogy a léčiva – cílený imunochemický záchyt –STAT 

92135

492

Drogy a léčiva – cílený imunochemický záchyt.            

92133

406


Název testu: Drug Control Buprenorphine test (BUP).

Katalogové číslo: 008A 104

Výrobce: ULTI MED Products GmbH, Reeshoop 1, 229 26 Ahrensburg, Deutschland
                www.ultimed.org
Dodavatelem setu je JK Trading s. r. o., Za Opravnou 5, Praha 5, tel. 257 220 760,

                praha@jktrading.cz


 

OSN-SPrincip a metoda postupuOSN-E

Test prokazuje přítomnost drogy, tj. buprenorfinu v moči. Konjugát (buprenorfin-protein) imobilizovaný v membráně testovací destičky soutěží kompetitivně s buprenorfinem event. přítomným v testované moči o možnost navázaní se na omezené množství zlatem značených protilátek nanesených na začátek testovací membrány. Barevné protilátky (anti-buprenorfin monoclonal antibody) jsou spolu s močí posunovány po membráně. Pokud v moči  drogy nejsou, dostanou se nenavázané protilátky OSN-Eaž k pásu konjugátů v oblasti označené písmenem T (Test region) a vytvoří zde barevný pruh, což znamená negativní výsledek testu. Pokud je v moči buprenorfin přítomný, navážou se na něj protilátky hned na počátku membrány a k pásu konjugátů se již jako volné nedostanou. V oblasti označené písmenem T proto žádný barevný pás nevznikne, což znamená pozitivní výsledek testu. Podmínkou vydání výsledku testu (pozitivní nebo negativní) je přítomnost barevného kontrolního pruhu v oblasti membrány označené písmenem C (Control region). Ten vytvoří reakce jiného systému antigen/protilátka přidávaného výrobcem do setu. Kontrolní barevný pruh potvrzuje, že test byl proveden správně a že je funkční, tj. že bylo na testovací destičku naneseno dostatečné množství moče a že se moč dobře nasákla do celé plochy testovací membrány.

 

OSN-SMísto provádění postupuOSN-E

Ústav klinické biochemie a hematologie Fakultní nemocnice Plzeň a Lékařské fakulty University Karlovy Plzeň, Alej Svobody 80, 304 60 Plzeň.

 

OSN-SBezpečnostní aspekty a podmínky prostředíOSN-E

Při stanovení je nutné, vedle obecných zásad bezpečnosti práce, viz Směrnice o bezpečnosti práce zachovávat především zásady bezpečné práce s potenciálně infekčním materiálem. Viz:

Směrnice pro práci s biologickým materiálem

Směrnice pro likvidaci biologického materiálu

 

OSN-SFáze před vyšetřením (příprava pacienta)OSN-E

   Buprenorfin hydrochlorid je syntetický opioid objevený v roce 1960 a k léčbě využívaný již od 1978. Je smíšený antagonista/agonista opiátových receptorů. Má relativně dlouhý poločas eliminace a působí proto déle než přírodní a semisyntetické opiáty (v opiu obsažený morfin, z opia připravovaný heroin).
   V gastrointestinálním traktu a v játrech je buprenorfin téměř kompletně rozštěpen na neúčinné metabolity, proto se při užívání využívají výhradně  parenterální cesty (mimo GIT). Vstřebávání do sliznice z dutiny ústní (tableta pod jazyk), vstřebáváním do kůže (náplast) a injekcí či infúzí do žíly případně do svalu či podkoží.

V krvi je poločas buprenorfinu 2 až 4 hodiny,  v moči přes 30 hodin. Vylučuje se mimo močí i žlučí.

   Buprenorfin je výhodným analgetikem navíc s sedativními a mírně antidepresivními účinky. Je obsažen v řadě léků (Subutex, Temgesic, Buprenex, Transtec, Subuxon).
   Další častou aplikací je substituční léčba u osob závislých na opiátech. Při tom je doporučena sublingvální aplikace. Ovšem v posledních letech dochází k masovému rozšíření zneužívání buprenorfinu a k injekční aplikaci uvedených léků po rozpuštění ve vodě, často v nebezpečné kombinaci s jinými psychotropními látkami (sedativy, anxiolytiky a alkoholem). Velmi se rozšířilo i obchodování s léky obsahujícími buprenorfin na „černém trhu“. 

OSN-SOdběr primárního vzorku (druh, nádobka, transport)OSN-E

Pro provedení kvalitativního průkazu buprenorfinu se odebírá běžným způsobem vzorek moče. Nevyžaduje se žádné zvláštní zacházení ani předběžná úprava. Pouze je nutné dbát na čistotu odběrových nádobek kvůli zamezení možné kontaminace vzorků moče a při prověřování kontrolovaných osob je vhodné dávat pozor na možné falšování (záměna vzorků, přidání vody či bělícího přípravku apod.).

 

OSN-SOmezení (interference a zkřížené reakce)OSN-E

·                     DrugControl Buprenorphine Test dává pouze kvalitativní orientační výsledek. Pro potvrzení nálezu je třeba použít specifičtější analytickou metodu. Jako konfirmační metoda je doporučena GC/MS nebo LC/MS.

·                     Výsledek testu může být ovlivněn jak chybou postupu, tak interferencí některých látek, přítomných v moči.

·                     Falšování vzorku, např. přidáním bělících prostředků může způsobit chybnou interpretaci nezávisle na použité analytické metodě. Při podezření na falšování je třeba zopakovat test s novým vzorkem moči.

·                     Pozitivní výsledek udává, že je v moči přítomný buprenorfin v koncentraci vyšší než cut-off, ale nedává informaci o jejím množství ani způsobu aplikace.

·                     Negativní nález nemusí znamenat absolutní nepřítomnost buprenorfinu v moči, může se jen jednat o koncentraci nižší než je cut-off.

·                     Test nerozpozná, zda byla droga užita v rámci léčení nebo zneužita drogově závislým.

OSN-SManipulace se vzorkyOSN-E

Průkaz buprenorfinu se má provést co nejdříve po odběru vzorku moče, nejlépe ten samý den. Vzorky moče je možné uchovávat po dobu 2 dnů v ledničce při teplotě 2-8 °C. Pro případné delší skladování je doporučeno uchovávat vzorky moče v mrazáku při teplotě –20 °C. Ochlazené nebo zmražené vzorky se před provedením testu musí nechat vytemperovat na teplotu místnosti (20-30 °C), stejně jako testovací destička a dávkovací plastová pipetka.

 

OSN-SPřístroje a pomůckyOSN-E

V setu dodávané testovací destičky a plastové pipetky na cca 0,2 ml

Hodiny.

SureScreen Reader k odečtu C a T proužků na naexponované testovací destičce. Katalogové číslo skeneru je 008 A 410E včetně vyhodnocovacího softwaru.

 

OSN-SReagencieOSN-E

Jsou obsaženy v membránách testovacích destiček zatavených do plastových obalů spolu s plastovými pipetkami na cca 0,2 ml. Plastové obaly se otevírají až těsně před provedením testu.

Uchovávají se buď v ledničce nebo při teplotě místnosti (2-30 °C). Nesmí se mrazit!
Funkčnost testu je výrobcem garantována až do doby exspirace vyznačené na obalu.

 

·         Na začátku testovací destičky je na membráně vždy v omezeném množství příslušná monoklonální protilátka proti buprenorfinu.

·         V oblasti testovací destičky označeného písmenem T jsou imobilizované příslušné proteinové konjugáty se kterými volné protilátky vytváří barevný proužek (pouze při nepřítomnosti drogy ve vzorku moče).

·         V kontrolní oblasti testovací destičky označené písmenem C jsou kozí-anti myší protilátky vytvářející barevný kontrolní proužek v případě, že je test funkční a bylo správně aplikováno dostatečné množství moče.

 

OSN-SSpotřební materiálOSN-E

Plastové špičky k pipetě.

Zkumavky na odběr vzorků močí.

 

OSN-SPříprava k činnostiOSN-E

Vytemperování vzorku moče a testovací destičky na teplotu laboratoře.
 

OSN-SPracovní postupOSN-E

·         Těsně před provedením testu vyjmout testovací destičku ze zataveného plastového obalu.

·         Přiloženou plastovou pipetkou nadávkovat do vzorkové kruhové jamky cca 0,2 ml moče (tj. 5 kapek).

·         Mezi 5 až 10 minutami (ne později!) po nadávkování vzorku odečíst výsledek, tj. vytvoření či nevytvoření barevných pruhů v oblastech C (Control region) a T (Test region). Dva pruhy = negativní, pouze C pruh = pozitivní, žádný pruh = nefunkční test, nutno opakovat s jinou testovací destičkou.

 

OSN-SStručný popis postupuOSN-E

Viz odstavec Pracovní postup.
 

OSN-SKalibrace a návaznostOSN-E

Kalibrace se neprovádí, protože screeningový test je pouze kvalitativní, tj. pozitivní výsledek znamená, že koncentrace dané drogy (metabolitu) v testovaném vzorku je stejná nebo vyšší, než koncentrace cut off, zatímco negativní výsledek znamená, že daná droga v testovaném vzorku buď vůbec není, nebo je v koncentraci nižší, než jsou koncentrace cut off.

 

OSN-SCharakteristika spolehlivostiOSN-E

Analytická senzitivita:  
Ze směsné moči bez přítomnosti drogy byly rozpuštěním Buprenorfinu vytvořeny vzorky:

µg/l

0

5

7,5

10

12,5

15

20

%cut off

0

50

75

100

125

150

200

 99% správnost vykazovaly výsledky při koncentraci vyšší než 20 a nižší než 5 µg/l, čili 100% nad a 50% pod hodnotu cut off (10 µg/l).

 

Analytická přesnost:
Byla provedena studie se 3 různými šaržemi testu, s cílem prokázat přesnost v sérii, mezi sériemi a mezi různými zacvičenými pracovníky. Byly připraveny identické sestavy vzorků s koncentracemi Buprenorfinu od 0 až do 20 µg/l. Při koncentracích nižších než 5 µg/l byly všechny výsledky negativní a při koncentraci nad 20 µg/l byly všechny výsledky pozitivní a to bez ohledu na šarži nebo provádějícího pracovníka.

 

Správnost:
Byla provedena studie s využitím skupiny 58 osob užívajících Buprenorfin a 150 osob u kterých se užívání nepředpokládalo. Výsledky testování pomocí DrugControl Buprenorphine Testu byly srovnávány jednak s udávaným užíváním drogy, jednak byly potvrzeny stanovením konfirmační metodou LC/MS.

Shoda s údaji pacientů byla u 94% a shoda s LC/MS u 99% výsledků.

 

Analytická specifičnost:
Změny specifické hmotnosti moče v rozmezí cca 1,010 – 1,030 g/l nemají významný vliv na výsledek testu. Bylo to prokázáno duplicitním testováním 15 vzorků moče s normální, sníženou i vysokou specifickou hmotností.
 
Změny pH v rozmezí 5 až 9 nemají významný vliv na výsledek testu. Bylo to prokázáno testováním alikvotních podílů směsné moče ve kterých bylo upraveno pH a poté v nich byl rozpuštěn Buprenorfin v koncentracích od 5 do 20 µg/l.

Zkřížená reaktivita byla studována přidáváním různých látek do směsné moči bez drogy a totéž do moči obsahující buprenorfin. Bylo tak prověřeno cca 250 různých látek, které nedávají pozitivní reakci při testu na buprenorfin a to ani při koncentraci 100 µg/l. V následující tabulce jsou uvedeny příklady.

Acetylsalicylová kyselina

Kanabinol

Hydrochlorthiazid

Papaverin

Aminopyrin

Normorfin

Hydrokodon

Penicilin

Amitriptylin

Kotinin

Ibuprofen

Pentobarbital

Ampicilin

Kreatinin

Lidokain

Serotonin

Askorbová kyselina

Efedrin

Riboflavin

Tetracyklin

Amphetamin

Diazepam

Etanol

Tryptamin

Aspartam

Digoxin

Meprobamat

Močová kyselina

Benzoová kyselina

Furosemid

Methadon

Theophylin

Bilirubin

Gentisová kyselina

Morfin

MDMA

Kofein

Hemoglobin

Oxazepam

Verapramil

 

OSN-SDokumentace, výpočty, zpracování dat a vydávání výsledkůOSN-E

Pokud je po provedení testu patrný pouze barevný pruh v oblasti C (Control Region) je výsledek hodnocen jako pozitivní, tj. v moči byla potvrzena přítomnost buprenorfinu v koncentraci vyšší než cca 10 µg/l.

Pokud jsou patrné dva barevné pruhy, tj. v oblasti C i v oblasti T (Test Region) je výsledek hodnocen jako negativní, tj. v moči nebyla prokázána přítomnost buprenorfinu cca 10 µg/l.

Pokud není patrný žádný barevný pruh, znamená to, že testovací destička je nefunkční, nebo že test nebyl správně proveden a musí se opakovat správným postupem s použitím jiné destičky.

 

Výsledek se zaznamenává do laboratorního informačního systému a po kontrole se předává na požadující oddělení budˇ pomocí počítačové sítě, nebo v písemné formě. V akutních případech se sděluje telefonicky.

 

OSN-SReferenční, varovné nebo kritické hodnotyOSN-E

Pozitivní nález, tj. koncentrace vyšší než cca 10 µg/l je možný pouze u osoby u které se buprenorfin záměrně aplikuje jako analgetikum. Ve všech ostatních případech je možné pozitivní nález hodnotit jako průkaz zneužívání drogy.  

OSN-SInterpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášeníOSN-E

- Buprenorfin je silné analgetikum často používané v léčbě jako doplněk nebo náhrada opioidů. Při této aplikaci je testování vhodné pro eventuální kontrolu opomenutí užití předepsané dávky (negativní nález) nebo naopak pro kontrolu náhodného překročení předepsané frekvence aplikovaných dávek (pozitivní nález).
- Buprenorfin je také často používán k substituční léčbě závislostí na opioidech. V substituční terapii je buprenorfin stejně efektivní jako Methadon, ale vykazuje menší vedlejší efekty. Terapeutická koncentrace má být nižší než 1 µg/l, čili při testování negativní.
- Často ale dochází k zneužívání a při testování se vyskytují i koncentrace vyšší než 20 µg/l.  

Eliminace z moči po jednotlivé dávce drogy může trvat až 6 dní.
Detekční okno pro průkaz drogy v moči je asi 3 dny.
 

OSN-SŘízení kvalityOSN-E

Před použitím nové šarže testu je doporučeno provést kontrolní vyšetření s vhodným kontrolním referenčním materiálem a to pozitivním i negativním.

V každé testovací destičce je potom kontrolní systém, který při vytvoření barevného pruhu v oblasti C (Control Region) potvrzuje správné provedení a funkčnost testovací destičky, tj. nadávkování dostatečného množství moči a správné nasáknutí do celé plochy membrány. Pokud se kontrolní barevný pruh nevytvoří je nutné test opakovat s použitím jiné destičky.
Subjektivní nejistotu odečtu C a T pruhů zvláště v hraničních oblastech koncentrací, lze výrazně snížit odečtením naexponované testovací destičky pomocí speciálního skeneru (SureScreen Reader) dodávaného výrobní firmou. Výsledek skenování lze uložit jako pdf dokument, ke kterému se lze vracet při eventuální následné diskuzi v příštích dnech. 

Kvalitativní (semikvantitativní) výsledek typu pozitivní, negativní postačuje pouze pro rychlou orientaci kliniků při akutních případech. Pro jiné účely (soudně lékařské, forenzní apod.) se výsledek musí validovat použitím vhodné kvantitativní, specifické metody založené například na principu GC/MS.

 

OSN-SPoznámky, zdroje variabilityOSN-E

 

OSN-SJiné související informaceOSN-E

 

OSN-SLiteraturaOSN-E

- Baselt, R.C.: Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man. 6th Ed. Biomedical Publ., Davis, CA., 129, 2002. 
- Shaw, L.M., Kwong, T.C. et al.: The Clinical Toxicology Laboratory, Contemporary Practice of Poisoning Evaluation. AACC Press, Washington DC, 513 p., 2001. ISBN 1-890883-53-0.

OSN-SAppendixyOSN-E

 

OSN-SAutorské poznámkyOSN-E

 

OSN-SRecenze, schváleníOSN-E

 

Autor a spoluautoři: Ing. Václav Senft

Recenze:

Vyjádření:

Revize: