OSN-SAbstraktOSN-E

Glutathion v erytrocytech je marker oxidačního stresu.

OSN-SOdkazy na jiné relevantní dokumenty, další informaceOSN-E

Glutathion

OSN-SFyziologická variabilitaOSN-E

OSN-SPatofyziologické mechanismy ovlivňující koncentraciOSN-E

Koncentraci redukovaného glutathionu ovlivňuje zejména oxidační stres; jeho následkem koncentrace GSH klesá, stejně jako poměr GSH/GSSG.

OSN-SPřímé následky abnormálních koncentracíOSN-E

Změny koncentrace GSH v erytrocytech (tkáních) za patologických stavů

Pokles koncentrace GSH může být způsoben

· snížením syntézy (nedostatek cysteinu, těžká poruch funkce jater)

· oxidačním stresem při zvýšené zátěži organismu volnými radikály. Pokles hladiny redukovaného glutathionu resp. poměru GSH/GSSG byl popsán u celé řady stavů s prokázanou či předpokládanou nadprodukcí VR. Patří k nim např. ischemie s následnou reperfuzí, maligní nádory, syndrom dechové tísně (ARDS), intoxikace alkoholem, ulcerózní kolitida, akutní pankreatitida, diabetes (byla zjištěna negativní korelace mezi hladinou GSH a glykémií, Jain a Vie 1994), sepse (Henderson a Hayes 1994), infarkt myokardu (Roth et al. 1989), Parkinsonova choroba (Jenner 1993), nižší hladina byla pozorována i po vysilujícím sportovním tréninku (Leichtweis et al. 1997), GSH a snížení aktivity GSHPx jsme spolu s jinými autory pozorovali u dialyzovaných nemocných (Racek et al. 1996; Weinstein et al. 2000) a u kuřáků (Holeček et al. 1997).

OSN-SReferenční intervalyOSN-E

Koncentrace GSH v erytrocytech: 1,5 – 2,0 mmol/l

OSN-SInterference in-vivoOSN-E

OSN-SOmezení stanoveníOSN-E

OSN-SPoužití ve výpočtech a odvozených parametrechOSN-E

OSN-SZnaky analytické metodyOSN-E

Stanovení glutathionu

Možné je stanovení vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC), kdy se stanoví současně více thiolů (cystin, homocystein aj.). Nejběžnější je však spektrofotometrické stanovení. Princip je následující:

Thioly poskytují s 4-chlor-1-methyl-7-trifluormethyl-chinolinium methylsulfátem thioethery; thioenter glutathionu je pak v silně alkalickém prostředí přeměňován na barevný thion. Výsledek je vyjadřován v mmol/l erytrocytů. Při stanovení v erytrocytech, které je nejběžnější, je třeba odebrat krev do heparinu, odstředit a uchovat pelety s erytrocyty do analýzy při - 80 °C. Soupravu na stanovení redukovaného glutathionu nabízí např. firma OXIS (Portland, USA).

Stejná firma vyrábí i soupravu na fotometrické stanovení poměru redukovaného a oxidovaného glutathionu (GSH/GSSG). Princip stanovení je následující. Problém měření GSSG je v jeho nízké koncentraci a v tom, že je nutné zamezit samovolné oxidaci GSH během přípravy vzorku. V soupravě je pro tento účel využíván 1-methyl-2-vinyl-pyridinium triflurometansulfonát (M2VP), který spolehlivě a rychle blokuje redukovaný glutathion a neinterferuje v následujícím stanovení. Nejprve se stanovuje celková koncentrace redukovaného a oxidovaného glutathionu. GSSG se na GSH převádí redukcí pyridinovým koenzymem NADPH za katalýzy glutathionreduktázou. GSH pak reaguje s  kyselinou 5, 5´-dithiobis-2-nitrobenzoovou (DTNB) za vzniku spektrofotometrického produktu měřeného při 412 nm. Druhé stanovení se provádí stejně, ale nejprve se přidáním M2VP blokuje redukovaný glutathion po redukci se stanoví samotný GSSG. Poměr GSH/GSSG se počítá podle vzorce: celkový GSH – 2 x GSSG/GSSG.

OSN-SEkonomické nákladyOSN-E

OSN-SPoužití pro klinické účelyOSN-E

Užití glutathionu v lékařství

Kromě stanovení GSH a poměru GSH/GSSG jakožto ukazatele oxidačního stresu lze užít GSH i jako lék. Již dávno je známo, GSH stoupá po podání N-acetylcysteinu. Ukázalo se však, že i po podání GSH stoupá jeho hladina poměrně rychle s maximem za 90 – 120 min, zvýšená hladina přetrvává asi 3 h. I když léčebné užití GSH není ještě zcela běžné, indikací mohou být všechny stavy vedoucí k poklesu jeho hladin, tj. obecně oxidační stres.

Existuje řada preparátů, obsahujících samotný glutathion (nejčastěji ve formě sodné soli) nebo ve směsi s jinými přípravky. Zkoušelo se podávání GSH u intoxikací těžkými kovy, alkoholem, u onemocnění jater, ke snížení vedlejších účinků protinádorové terapie cis-platinou, ve formě aerosolu u nemocných s idiopatickou plicní fibrózou.

OSN-SLiteraturaOSN-E

OSN-SPoznámkyOSN-E

OSN-SAppendixyOSN-E

OSN-SAutorské poznámkyOSN-E

Jaroslav Racek