OSN-SAbstraktOSN-E

Křížová zkouška neboli cross-match (CMT) je vyšetření, jehož cílem je detekovat v séru příjemce protilátky namířené proti HLA antigenům dárce. Správná interpretace křížové zkoušky umožňuje výběr nejvhodnějšího páru dárce-příjemce u transplantací orgánů nebo krvetvorných buněk a minimalizuje riziko vzniku hyperakutní vaskulární rejekce u orgánových transplantací.

OSN-SSouvisející informaceOSN-E

OSN-STextOSN-E

Křížová zkouška neboli cross-match (CMT) je vyšetření, jehož cílem je detekovat v séru příjemce protilátky namířené proti HLA antigenům dárce. Správná interpretace křížové zkoušky umožňuje výběr nejvhodnějšího páru dárce-příjemce u transplantací orgánů nebo krvetvorných buněk a minimalizuje riziko vzniku hyperakutní vaskulární rejekce u orgánových transplantací.

Principem křížové zkoušky je společná inkubace séra pacienta s lymfocyty potenciálního dárce, která umožní detekci specifické protilátky proti HLA antigenům vybraného dárce. V současné době je cross-match prováděn několika možnými technikami s rozdílnou sensitivitou a specificitou. V praxi by měla být zvolena taková kombinace metod, která kromě detekce donor-specifických HLA protilátek umožní i stanovení jejich imunoglobulinové třídy ( autoreaktivní protilátky třídy IgM totiž nejsou kontraindikací k provedení transplantace).

Přehled používaných technik:

1. Mikrolymfocytotoxický (NIH) cross-match (CTT)

Jedná se o nejčastěji používanou metodu křížové zkoušky. Cílovými buňkami jsou neseparované lymfocyty, popř. lymfocyty T nebo B (zvláště u vysoce imunizovaných pacientů a retransplantovaných). Tato metoda umožňuje detekci pouze komplement fixujících protilátek proti HLA antigenům I. i II.třídy a ve standardním provedení neumožňuje rozlišení mezi imunoglobulinovými třídami IgG a IgM.

Při modifikaci testu přidáním dithiothreitolu ( blokuje IgM protilátky) – tzv. DTT test, tato metoda může komplexně hodnotit význam detekovaných donor-specifických protilátek i z hlediska imunoglobulinových tříd:

Typ protilátky		Klinický význam
Ig třída	HLA třída
IgG	I. třída	Absolutní kontraindikace
IgG + IgM	I.třída
IgG	II. třída	Kontraindikace u retransplantovaných
IgG + IgM	II.třída
IgM	I. a/nebo II.třída	Nejsou kontraindikací

2. Prodloužený cross-match

Prodloužený cross-match je metoda používající stejné typy buněk a umožňující detekci stejného typu protilátek jako u standardního NIH cross-match. Prodloužením jednotlivých inkubačních časů na dvojnásobek však dochází ke zvýšení senzitivity testu o 5-7 %.

3. Antiglobulinový cross-match

Antiglobulinový cross-match ( další modifikace standardního NIH cross-match) využívá poznatku, že přidáním polyklonální protilátky proti lidskému imunoglobulinu se zvyšuje cytotoxicita některých protilátek, a tím je tedy zvýšena i sensitivita vlastního testu. Tato modifikace umožňuje detekci pouze komplement fixujících protilátek proti HLA antigenům I.třídy typu IgG.

4. Cross-match metodou průtokové cytometrie

Křížová zkouška metodou průtokové cytometrie (FCXM, z angl. flow cytometry cross-match) je mnohonásobně (až 100-krát) citlivější než všechny uvedené serologické metody.

Tato metoda umožňuje detekci nejen komplement fixujících, ale i komplement nefixujících protilátek proti HLA antigenům I.třídy, imunoglobulinových tříd IgG i IgM.

Princip metody odpovídá běžně používaným postupům průtokové cytometrie:

a) vazba aloprotilátek příjemce na membránové HLA molekuly dárce

b) detekce komplexu protilátkou proti lidským imunoglobulinům nebo jejich Fab fragmentům značenou fluorescein isothiocyanátem (FITC)

FCXM je prováděn u retransplantovaných pacientů, u vysoce imunizovaných příjemců před první transplantací a u potenciálních příjemců od živých příbuzných dárců orgánu.

5. Cross-match metodou ELISA

Metodika, která umožňuje stanovení komplement fixujících i komplement nefixujících protilátek proti HLA antigenům I.třídy, včetně určení imunoglobulinové třídy IgG.

Tato metoda je v současné době uváděna pouze pro výčet možností cross-match technik. Přestože umožňuje kvalitní screening a stanovení specificit HLA protilátek a spolehlivě odliší i non-HLA a autoreaktivní protilátky (ty nejsou relevantní pro výsledek transplantace), její využití v rámci předtransplantační křížové zkoušky musí být ještě potvrzeno na širších studiích. Důvodem je problematická interpretace výsledků ve srovnání s ostatními technikami cross-match.

OSN-SPoznámkyOSN-E

OSN-SAppendixyOSN-E

OSN-SLiteraturaOSN-E

1. Stites D.P., Terr A.I. : Základní a klinická imunologie, Victoria Publishing, Praha 1994

2. Dyer P., Middleton D.: Histocompatibility Testing: A Practical Approach, IRL Press, Oxford, New York, Tokyo, 1993

OSN-SAutorské poznámkyOSN-E

Zuzana Ambrůzová

Schváleno 1.7.2002 ČLS - Společnost alergologie a klinické imunologie, sekce laboratorní imunologie.OSN-E