Abstrakt
MEIA = Microparticle Enzyme Immunoassay, kvantitativní
analytická metoda založená na principu enzymové imunoanalýzy s fluorogenním
substrátem. Vazebná reagens (specifická protilátka) imobilizovaná na povrchu mikročástic.
Konjugát značený alkalickou fosfatázou, která katalyzuje hydrolýzu 4-metylumbelliferyl-fosfátu na
4-metylumbelliferon. Postup je využíván v systémech IMx nebo AxSYM firmy
Abbott.
Související informace
Text
Vlastní analýza probíhá principiálně v několika krocích:
·
navázání
stanovovaného analytu na vazebná místa specifické protilátky zakotvené na
povrchu submikronových částic
·
přidání
konjugátu s alkalickou fosfatázou. Ta je navázána buď na druhou specifickou
protilátku proti jiné antigenní determinantě analytu, nebo přímo na analyt či
jeho analog. Dojde k vytvoření
"sendviče" Ab1-Ag-Ab2(E), nebo obsazení volných vazebných míst
protilátky antigenem s konjugovaným enzymem Ab1-Ag(E).
·
separace
nenavázaného analytu nebo konjugátu se děje na speciální matrici ze skelných
vláken, na které se mikročástice ireverzibilně zachytí, takže mohou být účinně
promývány.
·
po
přidání substrátu dojde vlivem působení enzymu k přeměně
4-metylumbelliferyl-fosfátu na 4-metylumbelliferon, který je schopen emitovat
fluorescenční záření.
Podle charakteru analytu dochází ke dvěma principiálně
se lišícím imunochemickým systémům, které následně ovlivňují vztah závislosti
velikosti měřené odezvy na koncentraci sledovaného analytu:
·
vzniká
komplex Ab1-Ag-Ab2(E), kdy se druhá protilátka s konjugovanou alkalickou
fosfatázou váže na stanovovaný antigen již navázaný na imobilizované první
protilátce, pak je velikost měřené odezvy proporcionální koncentraci
stanovovaného analytu ve vzorku,
·
vzniká
komplex Ab1-Ag(E), kdy se konjugát alkalické fosfatázy a analogu stanovovaného
analytu váže na neobsazená vazná místa imobilizované protilátky, pak je
velikost měřené odezvy nepřímo úměrná koncentraci stanovovaného analytu ve
vzorku (čím více je analytu ve vzorku, tím méně zůstane neobsazených míst).
Poznámky
Pro kvantitativní stanovení je zapotřebí nejprve provést
analýzu kalibrátorů (obvykle 6 ks.), kalibrační křivka je uložena v paměti
přístroje a je použitelná poměrně dlouhou dobu.
Jako světelný zdroj pro excitaci se používá rtuťová
výbojka, po odfiltrování příslušnou optickou soustavou se využívá světlo s
vlnovou délkou 365 nm. 4-metylumbelliferon emituje fluorescenční záření o
vlnové délce 448 nm.
Appendixy
Literatura
IMx System Operation Manual, Abbott Diagnostics
Autorské poznámky