Abstrakt
Kapalinová chromatografie zahrnuje techniky, kdy mobilní
fází je vždy kapalina, stacionární fází je buď kapalina zakotvená na nosiči -
kapalinová rozdělovací chromatografie (LLC), gelová permeační chromatografie (GPC),
nebo pevná látka - kapalinová adsorpční (LSC, TLC), iontoměničová (IEC),
afinitní chromatografie. V klinické praxi se rovněž často používá tzv. extrakce
na tuhé fázi (SPE) pro izolaci a čištění látek z biologických materiálů.
Související informace
Text
Kapalinová chromatografie se podle uspořádání dělí na:
a.
planární
v podobě papírové (PC) nebo tenkovrstvé (TLC) chromatografie,
b.
sloupcovou
- klasická kolonová (CC), extrakční (SPE) nebo vysokoúčinná (HPLC).
Podle způsobu zavádění vzorku na kolonu a eluční síly
mobilní fáze:
a.
frontální (MF = mobilní fáze)
|
|
b.
vytěsňovací
|
|
c.
eluční
|
|
Obecnější uplatnění má především způsob eluční. Složky vzorku
jsou silněji sorbovány v koloně než složky mobilní fáze, jednotlivé složky jsou
eluovány z kolony v pořadí sorpce na stacionární fázi a jsou
mezi sebou odděleny čistou mobilní fází. Mění-li se složení mobilní fáze s časem, jedná se o gradientovou
eluci.
Derivatizace v kapalinové chromatografii
1.
Reakce
vedoucí k tvorbě derivátů detegovatelných v UV a viditelné oblasti spektra
(technika velmi rozšířená v planárním i kolonovém uspořádání kapalinové chromatografie).
2.
Činidlo
vstupující do reakce vytváří deriváty, které vykazují fluorescenci a snižují
mez detekce ve srovnání s UV detekcí zpravidla více než o jeden řád.
3.
Deriváty
umožňující radiochemickou detekci - do molekuly derivátu se vnese izotopem
značená sloučenina.
4.
Derivatizační
techniky vhodné pro elektrochemickou detekci - do molekuly derivátu jsou
zaváděny elektrochemicky (polarograficky) aktivní skupiny schopné
elektroredukčních či elektrooxidačních reakcí (např. nitroskupiny).
Autorské poznámky
Jaroslava Vávrová