Abstrakt
Dvourozměrné elektroforetické dělení složitých směsí je
kombinací dvou základních elektromigračních postupů - izoelektrické fokusace na
polyakrylamidovém gelu a následné plošné akrylamidové elektroforézy.
Související informace
Text
Dvourozměrná elektroforéza
Metoda známá jako dvourozměrná elektroforéza je v
literatuře rovněž označována jako metoda ISO-DALT (ISO = izoelektrická fokusace,
DALT = dělení dle molekulové hmotnosti). V prvním stupni tohoto postupu se
dělená směs podrobí izoelektrické fokusaci na polyakrylamidovém gelu (gel s
velkými póry s přidaným amfolytem), ve směru kolmém je pak provedena zónová
elektroforéza s přídavkem detergentu sodium dodecyl sulfátu (SDS), který
normalizuje rozdíly v efektivním náboji. Po provedeném elektroforetickém dělení
se získá dvourozměrná mapa (např. bílkovin) přítomných ve směsi. Skvrny se
detekují běžnými vybarvovacími technikami. Touto technikou lze na desce 15x15
cm rozdělit až několik set bílkovin, avšak vyhodnocování těchto map je obtížné,
podmínkou je použití řádkovací denzitometrie v návaznosti na počítačové
hodnocení dat. Komplikací pro tuto techniku může být také to, že koncentrace
látek, která je optimální pro izoelektrickou fokusaci je podstatně nižší než
optimální pro elektroforetický stupeň separace. Proto při běžné barvící
technice často méně intenzívní skvrny (jež bývají většinou důležité) uniknou
pozornosti, nebo se v některé části mapy objeví dlouhé šmouhy, vznikající
přetížením gelu při izoelektrickém zaostřování.
Poznámky
Appendixy
Literatura
Autorské poznámky
Jaroslava Vávrová