Abstrakt
Souprava AxSYM Cocaine Metabolite, kat. č. 3B24-20 umožňuje
semikvantitativní stanovení kokainu a jeho metabolitů v moči principem
FPIA (Fluorescence Polarization Immunoassay) na analyzátoru AxSYM firmy Abbott.
Seznam souvisejících dokumentů
Kódy, názvy, definice a terminologie
Chemické vzorce:
Kokain, tj. benzoylmethylekgonin:
Hlavní metabolity:
benzoylekgonin (vzniká neenzymatickou hydrolýzou)
ekgonin methyl ester (vzniká enzymatickou hydrolýzou působením krevních cholinesteráz)
Národní číselník laboratorních položek:
04976 Kokain (U;
látková konc. [µmol/l] * )
11540 Kokain (průkaz)
(U; přítomnost [ - ] * )
Laboratorní informační systém STAPRO:
Globální kód: 1697
Kokain v moči
Seznam zdravotních
výkonů VZP:
99151 Psychotropní
látky jednotlivě. (427
bodů)
92135 Drogy a léčiva –
cílený imunochemický záchyt –STAT (492
bodů)
92133 Drogy a léčiva –
cílený imunochemický záchyt.
(406 bodů)
Cocaine Metabolite je
diagnostický test určený pro semikvantitativní měření koncentrace kokainu a
jeho metabolitů v moči na analyzátoru Abbott AxSYM.
Výrobcem setu je Abbott Laboratories, Diagnostics Division, Abbott Park, IL 60064,
USA.
Dodavatelem setu je Abbott Laboratories, s. r. o. , Diagnostics Division, Hadovka
Office Park, Evropská 2590/33d, 160 00 Praha 6, tel. 267 292 111
Katalogové číslo setu je 3B24-20.
Princip a metoda postupu
Při ozařování zářením určité vlnové délky vydávají některé látky záření
větších vlnových délek, tzv. fluorescenční
záření. Předpokladem ke vzniku fluorescence je absorpce záření, vedoucí
k excitaci molekul, tj. přechodu do nestabilního excitovaného stavu. Při
návratu zpět do základního stavu se část energie ztratí ve formě tepla, část se
vyzáří právě ve formě fluorescence.
Analyzátor AxSYM využívá technologii FPIA (Fluorescence
Polarization Immunoassays), ve které se kombinují dva principy:
- Kompetitivní reakce: Stanovovaný analyt - kokain ze vzorku
soutěží s v reagencii dodávaným analytem - kokainem značeným
fluoresceinem o vazebná místa na
protilátce. Úspěšnost navázání je úměrná jejich relativní koncentraci. Při
vysoké koncentraci analytu ve vzorku zůstane nenavázaný značený analyt, při
nízké koncentraci analytu ve vzorku se naopak značený analyt převážně
naváže.
- Fluorescenční polarizace: Přístroj měří intenzitu
fluorescenčního záření emitovaného fluoresceinem jen v jedné polarizované
rovině. Pokud zůstane značený analyt nenavázaný, jeho malá molekula rychle
rotuje a fluorescenční záření se v měřené polarizované rovině projeví jen
málo. Pokud se značený analyt naváže na velkou, jen pomalu rotující molekulu
protilátky, je intenzita fluorescenčního záření v měřené polarizované
rovině velká.
Měřená intenzita
polarizovaného záření je tedy nepřímo úměrná koncentraci analytu ve vzorku.
Místo provádění postupu
Laboratoř vybavená analyzátorem Abbott AxSYM.
Bezpečnostní aspekty a podmínky prostředí
Při stanovení je
nutné, vedle obecných zásad bezpečnosti práce, viz Směrnice o bezpečnosti
práce zachovávat především zásady bezpečné práce s potenciálně
infekčním materiálem. Viz:
Směrnice pro práci s
biologickým materiálem
Směrnice pro likvidaci
biologického materiálu
Dezinfekce,
sterilizace
Reagencie jsou
konzervovány přídavkem jedovatého azidu sodného.
Mimo negativní zdravotní působení je azid sodný rizikový proto, že může reagovat s olovem nebo mědí za
vzniku explozivních azidů.
Čistící roztok (TEAH)
může iritovat kůži a oči. Při kontaktu bezprostředně opláchnout vodou.
R22 Škodlivé při požití
R32 Při kontaktu s kyselinami vzniká velmi
toxický plyn
S35 Materiál i obal musí být zneškodněn bezpečným
způsobem.
S36 Používat vhodný ochranný oděv
S46 Při požití okamžitě vyhledat lékařskou pomoc
Fáze před vyšetřením (příprava pacienta)
Kokain je alkaloid izolovaný z rostliny Erythroxylon coca, což je keř, který původně rostl ve vyšších
nadmořských výškách jihoamerických And, ale nyní se pěstuje i v Indii, Africe
a Indonesii. Z cca
Kokain se rychle metabolizuje hydrolýzou esterových vazeb, především na
benzoylekgonin (35-54 %) a ekgonin methyl ester (32-49 %). Obě tyto látky dále
přechází na ekgonin. Kokain i jeho metabolity, které jsou rozpustnější ve vodě než
původní droga, jsou převážně vylučovány močí (již během prvního dne se vyloučí
cca 86 % podané dávky). Kokain a jeho metabolity v moči se stanovují
různými technikami (imunoanalýza, chromatografie). Imuno testy jsou cílené
především na benzoylekgonin, jako hlavní močový marker užívání kokainu, ale
vykazují křížovou reakci i s kokainem aj.
Kokain má i léčebné využití, například jako lokální anestetikum, ale v
současnosti patří kokain mezi nejčastěji zneužívané drogy. Kokain totiž
způsobuje pocit euforie, sebedůvěry a zvýšené energie i když jen krátkodobě.
Tyto psychologické účinky doprovází zvýšená srdeční frekvence, rozšíření
zornic, horečka, třes a pocení. Velmi nepříjemné jsou jevy doprovázející
odeznívání aplikované dávky: deprese, popudlivost, malátnost, úzkost,
halucinace až paranoia. Při chronickém užívání dochází ke snížení paměti, a
schopnosti se koncentrovat, objevuje se stihomam a konečným důsledkem bývají
poruchy mezilidských vztahů, selhání v zaměstnání, chudoba a tlak ke
kriminálnímu jednání ve snaze získat další drogu. Snadno přitom dochází
k přechodu na jiné drogy.
Odběr primárního vzorku (druh, nádobka, transport)
Vzorky močí se musí odebírat do čistých, dříve nepoužitých nádobek. Pro
semikvantitativní analýzu kokainu a jeho metabolitů je zapotřebí odebrat
minimálně 2-3 ml moče, aby bylo případně možné analýzu zopakovat. Ihned po
odběru je nutné vzorky řádně označit, aby se předešlo případné záměně vzorků,
což je zvlášť důležité např. při forenzní indikaci.
Pro transport i pro uchovávání před stanovením je třeba vzorky ochladit
v lednici na 2-
Omezení (interference a zkřížené reakce)
-
Set AxSYM Cocaine Metabolite poskytuje pouze
předběžné semikvantitativní výsledky, které je u pozitivního nálezu třeba
potvrdit nezávislou metodou založenou nejlépe na principu GC/MS.
-
Výsledek stanovení kokainu a jeho metabolitů musí
být porovnáván s všemi dostupnými klinickými informacemi i s výsledky
všech ostatních provedených vyšetření.
-
U některých vzorků močí se může vyskytnout
překročení povolené základní hodnoty fluorescence ( chybové hlášení 1065
Invalid test results, background intensity too high). Tento problém nelze řešit
opakováním analýzy po naředění vzorku, ale musí se aplikovat jiná metoda
stanovení.
Manipulace se vzorky
-
Před analýzou se musí vzorky (rozmrazit)
vytemperovat na teplotu laboratoře, promíchat a zkontrolovat, zda ve
vzorku napipetovaném (minimálně 150 µl pro rutinní + 97 µl pro STAT analýzu) do
vzorkové nádobky nejsou bubliny, které je případně nutné odstranit.
-
Při pipetování apod. se musí věnovat maximální
pozornost zabránění eventuální kontaminaci vzorků navzájem, tj. na každý vzorek
použít novou špičku.
-
Aby se minimalizoval vliv odpařování, musí se
všechny vzorky (ale i kontroly a kalibrátory) proměřit nejpozději do 3 hodin po
vložení do vzorkového kruhu analyzátoru AxSYM.
-
Neměly by se analyzovat vzorky močí se zjevnou
mikrobiální kontaminací.
Přístroje a pomůcky
Analyzátor Abbott AxSYM
Pipety
Reagencie
Reagencie obsažené v reagenční soupravě Cocaine Metabolite No.
3B24-20 postačují pro semikvantitativní stanovení kokainu a jeho metabolitů
v 100 vzorcích močí (s reagenciemi je vždy současně dodáváno 100 ks
reakčních nádobek).
V soupravě
jsou tři lahvičky:
Reagenční lahvička čís. 1: 5,4 ml < 1% ovčí protilátky proti
metabolitu kokainu v pufru s proteinovým stabilizátorem a
konzervačním činidlem (azid sodný)
Reagenční lahvička čís. 2: 4,0 ml přípravného roztoku v pufru
s proteinovým stabilizátorem a konzervačním činidlem (azid sodný)
Reagenční lahvička čís. 3: 5,3 ml < 0,01% metabolitu kokainu
značeného fluoresceinem v pufru s povrchově aktivní látkou a
proteinovým stabilizátorem. Jako konzervační činidlo je opět azid sodný.
Reagencie 1, 2 , 3 musí být uchovávány při 2-
V nechlazeném reagenčním kruhu analyzátoru mohou být reagenční soupravy maximálně po dobu 336
kumulativních hodin (to odpovídá cca 48 osmihodinovým pracovním směnám). Po této
době a v době po exspiraci setu by se již reagencie neměly používat.
Výrobce nedoporučuje míchání reagencií z různých výrobních šarží.
Ostatní potřebné
reagencie:
Čistící roztok (AxSYM Probe Cleaning Solution No. 9A35-05): 2 ks
lahví á 220 ml 2% tetraethylamonium hydroxidu - TEAH . Roztok je stabilní
v uzavřených lahvích při 15-
Ředící roztok 4 (Line Diluent No. 8A46) : 1 láhev
Spotřební materiál
Reakční nádobky (Reaction Vessels) dodávané s reagenční soupravou.
Vzorkové nádobky (Sample cup) No. 8A76-01.
Špičky k automatické pipetě 20-200 µl.
Papír do tiskárny.
Příprava k činnosti
Při zavedení nové metody:
Do analyzátoru se musí nainstalovat software metody Cocaine
Metabolite z diskety No. 3D54-03 nebo vyšší (336 hodin stability reagencií
v nechlazeném reagenčním kruhu analyzátoru).
CONFIGURATION-INSTALLATION-SCAN DISK-označit metodu-INSTALL ASSAY
Parametry metody včetně kalibrace viz odstavec Appendixy.
Dále se musí nadefinovat příslušné kontrolní materiály k metodě.
CONFIGURATION-CONTROL-označit metodu-ADD CONTROL-zadat název kontroly-F2
ADD CONTROL-F6 CONTROL DETAILS-zadat údaje z příbalového letáku-F6 SAVE
Dále musí být změřená kalibrace (buď celá 6 bodová, nebo zkrácená –
master 2 bodová) a vzápětí kontrolní materiály.
ORDERLIST-F4 CALIBRATION-označit metodu-F6 ADD-nakapat kalibrátory-RUN
ORDERLIST-F5 CONTROL-označit metodu-F6 ADD-nakapat kontroly-RUN
Do přípravy analyzátoru ještě náleží prověření stavu pomocných reagencií
a kontrola zaplnění prostorů pro odpad.
Při rutinním provedení již zavedené metody:
Prověří se stav pomocných reagencií a zkontroluje se zaplnění prostorů
pro odpad.
Pracovní postup
Postup obsluhy:
Pokud je při zapnutém a vytemperovaném analyzátoru zkontrolovaná
kalibrace (viz odstavec Kalibrace), výsledky kontroly kvality (viz odstavec
Řízení jakosti), stav pomocných reagencií a zaplnění odpadu (viz Inventář),
spočívá rutinní provedení analýzy v následujících činnostech:
- zadání vzorků a v nich požadovaných metod (ORDER LIST) – zadání
lze provést lokálně či PC přenosem
- vložení vzorkových segmentů s potřebným množstvím vzorku
v každé vzorkové nádobce
- vložení reagenčních souprav
- odstartování analýzy (RUN)
- sledování průběhu analýzy (ORDER STATUS) a případné řešení hlášených
závad
- vytištění (uvolnění výsledků) (RESULTS)
- uložení reagenčních souprav do lednice
Kroky probíhající během analýzy FPIA v analyzátoru AxSYM:
1.
Ve vzorkovém centru se vzorkovou jehlou napipetuje
vzorek do příslušné jamky v reakční nádobce a dále všechny reagencie
obsažené v reagenční soupravě.
2.
V ředící jamce reakční nádobky se smíchá
vzorek a ředící roztok č. 4.
3.
Reakční nádobka je ihned transportována do
procesního centra, kde se již veškeré další pipetování realizuje procesní
jehlou.
4.
Do kyvety reakční nádobky se pipetuje alikvotní
podíl zředěného vzorku, reagencie 1 (protilátka v pufru), reagencie 2
(přípravný roztok a pufr) a ředícího roztoku č.4.
5.
Vše se inkubuje na reakční teplotu. Potom se
provede první měření intenzity fluorescenčního záření, naměřená hodnota
odpovídá blanku.
6.
Do kyvety reakční nádobky se přidají další části
zředěného vzorku, reagencií
7.
Během inkubace proběhne kompetitivní reakce a poté
se provede druhé měření intenzity polarizovaného záření. Intenzita je nepřímo
úměrná koncentraci analytu (kokainu a jeho metabolitů) ve vzorku.
1.
3. Podle platné kalibrace přístroj vyhodnotí
koncentraci kokainu a jeho metabolitů v analyzovaném vzorku moče.
Stručný popis postupu
- zadání vzorků a v nich požadovaných metod (ORDER LIST)
- vložení vzorkových segmentů s potřebným množstvím vzorku
v každé vzorkové nádobce
- vložení reagenčních souprav
- odstartování analýzy (RUN)
- sledování průběhu analýzy (ORDER STATUS) a případné řešení hlášených
závad
- vytištění (uvolnění výsledků) (RESULTS)
- uložení reagenčních souprav do lednice
Kalibrace a návaznost
Přesný postup realizování kalibrací je uveden v SOPT Abbott AxSYM a v kapitole 6 manuálu.
Lze provést buď standardní 6 bodovou kalibraci nebo zkrácenou 2 bodovou
(master) kalibraci:
Standardní
kalibrace:
X SYSTEMS Ò Cocaine
Metabolite Calibrators No. 9670-06, celkem 6 lahviček (1x 4 ml A, 5x 2,5 ml
B-F). Kalibrátor A obsahuje lidskou moč a kalibrátory B-F obsahují
benzoylekgonin v matrici lidské moče konzervované azidem sodným,
v následujících koncentracích:
|
Lahvička |
Koncentrace
benzoylekgoninu ( μmol/l) |
Koncentrace
benzoylekgoninu ( µg/l) |
|
A |
0,00 |
0 |
|
B |
1,04 |
300 |
|
C |
3,46 |
1000 |
|
D |
6,91 |
2000 |
|
E |
10,37 |
3000 |
|
F |
17,28 |
5000 |
Bezprostředně po změření standardní kalibrace je doporučeno proměřit
všechny hladiny kontrolních materiálů.
Master
kalibrace:
AxSYM Cocaine Metabolite Master Calibrators No. 3B24-30, celkem 2
lahvičky á 4 ml, obsahující
benzoylekgonin v matrici lidské moče konzervované azidem sodným,
v následujících koncentracích:
|
Lahvička |
Koncentrace
benzoylekgoninu ( μmol/l) |
Koncentrace
benzoylekgoninu ( µg/l) |
|
1 |
0,00 |
0 |
|
2 |
1,04 |
300 |
Pokud je u metody možné použít zkrácenou kalibraci, je v krabičce
reagenční soupravy vložena kartička s čárovým kódem obsahujícím informace
o křivce pro zkrácenou kalibraci pro danou výrobní šarži reagencií.
Při přechodu na novou šarži reagencií se nejdříve musí do systému pomocí
čárového kódu vložit informace o zkrácené kalibrační křivce (STORED RESULTS -
CALIBRATION REVIEW - F4 NEW LOT - F4 SCAN CURVE - F6 SAVE) a potom proměřit (v
dubletu) oba master kalibrátory (ORDERLIST– F4 CAL - vybrat metodu - vybrat
master kalibraci - F6 ADD - F1 EXIT). Bezprostředně potom je doporučeno změřit
všechny hladiny kontrolních materiálů.
Jakmile je kalibrace proměřena, akceptována a uložena, mohou se testovat vzorky bez
dalšího rekalibrování až do té doby, než:
- se začnou používat reagencie z jiné výrobní šarže
- se vyskytnou výsledky kontrolních vzorků mimo přípustné rozmezí
- než se instalují jiné parametry metody
- se provede významná údržba systému spojená s případnou výměnou
nějaké součásti
Bezprostředně po rekalibraci je vždy doporučeno proměřit všechny hladiny
kontrolních materiálů.
Kalibrátory musí být uchovávány při 2-
Charakteristika
spolehlivosti
Mez detekce (průměr + 3 směrodatné odchylky slepého vzorku, tj. nejnižší koncentrace
odlišitelná od nulové hladiny): 30 µg/l, tj. 0,105 μmol/l
Pracovní rozsah: bez ředění do 5000 µg/l, tj. 17,28 μmol/l při semikvantitativním
stanovení.
Interference:
- S výsledky
stanovení může interferovat přítomnost detergentů
ve vzorku.
- Chlornan sodný jako silné oxidační
činidlo může způsobit oxidaci některých analytů a způsobit tak falešné snížení
výsledku.
- Výrobci dále
testovali vliv řady běžných látek na
výsledek testu. V tabulce jsou uvedeny koncentrace, při kterých způsobená
chyba nepřekročila 10 %:
|
Látka |
Koncentrace (g/l) |
|
Aceton |
10 |
|
Kyselina askorbová |
15 |
|
Bilirubin |
2,5 |
|
Kreatinin |
5 |
|
Etanol |
10 |
|
Glukóza |
20 |
|
Hemoglobin |
1,15 |
|
Kyselina šťavelová |
1 |
|
Riboflavin |
0,075 |
|
Chlorid sodný |
60 |
|
Celkové proteiny |
0,5 |
|
Urea |
60 |
Specificita:
Výrobci prověřili
případný vliv přídavku kokainu a ekgoninu ke vzorku. V tabulce jsou
uvedeny koncentrace, které vyvolaly křížovou reakci vyšší než mez detekce (30
µg/l):
|
Látka |
Koncentrace (µg/l) |
|
Kokain |
10000 |
|
Ekgonin |
10000 |
V další tabulce
jsou uvedeny příklady látek, které
dávaly negativní křížovou reakci při
testovací koncentraci 100 000 µg/l:
Látka
|
Látka
|
|
Acetaminophen
(Paracetamol) |
Erythromycin |
|
Kyselina
acetylsalicylová |
Furosemid |
|
Amitriptylin |
Halperidol |
|
Amobarbital |
Ibuprofen |
|
Amoxicilin |
Ketamin |
|
Ampicilin |
Morfin |
|
Aspartam |
Phenethylamin |
|
Alprazolam |
Phenylbutazon |
|
Benzokain |
Phenylpropanolamin |
|
Kyselina benzoová |
Nikotin |
|
Kofein |
Penicilin G |
|
Chloramfenikol |
Chinin |
|
Cholesterol |
Progesteron |
|
Kodein |
Sekobarbital |
|
Diazepam |
Methadon |
|
Erytromycin |
Salicylová kyselina |
|
Digoxin |
Serotonin |
|
Estriol |
Tetracyklin |
|
Ephedrin |
Tramadol |
|
Epinephrin |
Theofylin |
Přesnost: Přesnost výrobci setu prověřili
na třech směsných vzorcích močí, které byly analyzovány pomocí jedné šarže
reagencií a stejné kalibrace vždy 2x denně po dobu 20 dnů.
SD = směrodatná odchylka %VK = variační koeficient v %
|
Opakovatelnost (v sérii) |
Reprodukovatelnost (v čase 20 dnů) |
|||||
|
Moč (hladina) |
Průměr
(µg/l) |
SD (µg/l) |
%VK |
Průměr
(µg/l) |
SD
(µg/l) |
%VK |
|
Nízká
(500 µg/l) |
550,16 |
38,00 |
6,91 |
550,16 |
54,96 |
9,99 |
|
Střední
(1500 µg/l) |
1553,74 |
82,29 |
5,30 |
1553,74 |
123,92 |
7,98 |
|
Vysoká
(3000 µg/l) |
3120,78 |
192,38 |
6,16 |
3120,78 |
240,15 |
7,70 |
Správnost:
Byla výrobci setu prověřena pomocí
standardních přídavků benzoylekgoninu a to jednak do moče, jednak do
ředícího roztoku č. 4. Tyto dvě sady vzorků se stoupajícím obsahem
benzoylekgoninu byly analyzovány běžným způsobem.
% výtěžnosti (recovery) = 100 x konc. v ředícím roztoku č.4 /
koncentrace v moči
|
Přídavek (µg/l) |
Konc. v moči (µg/l) |
Konc. v řed. r. 4 (µg/l) |
% výtěžnost (recovery) |
|
300 |
321,00 |
293,14 |
91,32 |
|
500 |
521,53 |
520,70 |
99,84 |
|
1000 |
941,23 |
979,39 |
104,05 |
|
1500 |
1642,85 |
1553,67 |
94,57 |
|
2000 |
2131,79 |
2128,99 |
99,87 |
|
3000 |
3028,27 |
3009,57 |
99,38 |
|
5000 |
4613,44 |
4740,87 |
102,76 |
Průměrná výtěžnost = 98,82 ± 4,5 %
Porovnání metod:
Dále byla správnost
prověřena srovnáním výsledků setu AxSYM
Cocaine metabolite s výsledky získanými referenční metodou založenou na
principu GC/MS:
Analýzy na AxSYMu byly realizovány přímo v Abbott Laboratories,
analýzy GC/MS realizovala referenční laboratoř. Shoda či rozdílné hodnocení
nálezu (pozitivní-negativní) je závislé na nastavené hodnotě cut-off, tj. na
hodnotě, nad kterou se u výsledku na AxSYMu objeví označení pozitivity vzorku
na přítomnost kokainu a jeho metabolitů (TP = správně pozitivní, TN = správně
negativní, FP = falešně pozitivní, FN = falešně negativní).
% shody = (TP + TN) / (TP + FP + TN + FN) x 100
[%]
Celkem 100 vzorků močí obsahujících benzoylekgonin.
|
Cut-off pro AxSYM (µg/l) |
%shody= (TP+TN) / (TP+FP+TN+FN) x 100 |
|
300 |
88 |
|
1000 |
71 |
|
3000 |
52 |
Dokumentace, výpočty, zpracování dat a vydávání výsledků
Analyzátor AxSYM
vyhodnotí naměřenou fluorescenci vzorku podle platné kalibrace a určí
koncentraci ve vzorku, která je nepřímo úměrná fluorescenci.
Výsledek lze
vytisknout na připojené tiskárně. Mimo to je možný automatický přenos výsledku
do laboratorního informačního systému (například LIS STAPRO). Po analytické a
lékařské kontrole je potom možný přenos výsledků prostřednictvím počítačové
sítě až na příslušnou kliniku nebo oddělení.
Jestliže při měření
dojde například k překročení kalibračního limitu, nebo k nějaké závažné chybě
při analýze, objeví se na monitoru vedle výsledku příslušná značka (podrobnosti
viz manuál analyzátoru).
Výsledky se při
semikvantitativním stanovení vydávají v μmol/l , eventuálně v µg/l
. Předávají se (po splnění všech požadavků na stanovení a po tom, kdy výsledky
projdou analytickou a lékařskou kontrolou) na analýzu požadující pracoviště buď
v elektronické formě pomocí počítačové sítě, nebo po tisku v papírové formě
spolu s vyznačením fyziologických hodnot, eventuálně s hvězdičkovým vyznačením
jejich překročení.
Všechny výsledky se
archivují v elektronické formě v laboratorním informačním systému a mimo to
ještě v papírové formě v jednou denně vytištěné hlavní knize laboratoře.
Pozn.: Přepočet jednotek: ng/ml =
µg/l, µg/l x 0,0035 = μmol/l
Referenční, varovné nebo kritické hodnoty
Hodnota cut-off se nastavuje v parametrech testu na řádcích
Jako doporučená hodnota cut-off je výrobcem nastaveno 1,04 μmol/l, tj. 300 µg/l.
Výsledky vyšší než cut-off jsou považovány za pozitivní a vydává se
konkrétní nalezená hodnota a to až do nejvýše vydávaného výsledku, tj. do 17,28
μmol/l (5000 µg/l). Při překročení se již vydává jen > 17,28 μmol/l
(> 5000 µg/l).
Pozn.: Je možné
využít ruční ředění vzorků 1:3 pomocí
kalibračního roztoku A a potom lze vydávat výsledky až do 51,84 μmol/l
(15000 µg/l).
Případné výsledky nižší než cut-off jsou brány jako negativní.
Výsledek se vydává ve tvaru < 1,04 μmol/l (< 300 µg/l).
Interpretace výsledků, konzultační činnosti
a hlášení
K hodnocení výsledků je třeba přistupovat velmi opatrně, protože
výsledek může být ovlivněn celou řadou faktorů, jako je např. hustota
analyzované moči apod.
Pro definitivní potvrzení případných pozitivních nálezů (zvláště při
prvním pozitivním záchytu) je nutné použít specifickou metodu založenou nejlépe
na principu GC/MS.
Doba, po kterou se mohou kokain a jeho metabolity detekovat v moči
je variabilní (řádově hodiny až dny) a závisí na řadě faktorů.
-
na použitém typu (citlivosti) imunochemického
semikvantitativního testu
-
na aplikované dávce
-
na akutním či chronickém užívání
Koncentrace kokainu a jeho metabolitů v moči nekoreluje
s hladinou kokainu a jeho metabolitů v krvi. Je to pouze potvrzení
předešlé expozice vyšetřované osoby kokainu.
Řízení kvality
Ke kontrole kvality jsou určeny kontrolní materiály X SYSTEMS
Multiconstituent Controls No. 9687-12.
Tyto kontrolní materiály jsou navázány na interní referenční standard
firmy Abbott vytvořený gravimetrickou metodou z čistých substancí (bezvodý
benzoylekgonin).
Každé balení obsahuje 6 lahviček, tj. vždy dvě lahvičky á 4,5 ml pro
každou z kontrolovaných hladin.
|
Koncentrace
benzoylekgoninu v matrici lidské moče, konzervované azidem sodným. |
||
|
Lahvička |
μmol/l |
µg/l |
|
L (Low) - nízká hladina |
1,73
(1,184-2,272) |
500 (342,66 –
657,34) |
|
M (Medium) – střední hladina |
5,18 (3,795 –
6,573) |
1500 (1098,20 –
1901,80) |
|
H (High) – vysoká hladina |
10,37 (7,554 –
13,182) |
3000 (2185,92 –
3814,08) |
Stabilita:
Kontrolní materiály se
nesmí zamrazovat. V tom případě jsou při skladování v lednici (2 -
Každá laboratoř by si
měla určit vlastní frekvenci provádění kontrol. Podle zásad správné
laboratorní praxe by to mělo být minimálně jednou denně během analýzy rutinních
vzorků, vždy při objevení významného posunu výsledků a potom vždy po provedení
kalibrace. Je doporučeno aby kontrola probíhala na dvou hladinách, jedna pod
hodnotou cut-off a druhá nad cut-off.
Výsledky získávané při
analýzách kontrolních materiálů se průběžně zaznamenávají do kontrolních
regulačních diagramů. V regulačních diagramech jsou mimo průměrných hodnot
kontrolního materiálu vyznačeny i varovné (průměr ± 2 x směrodatná
odchylka) a regulační (průměr ± 3 x směrodatná odchylka) meze. Eventuální
překročení těchto mezí (nebo i jen překročení některého z nastavených
Westgaardových pravidel určených pro vyhodnocování regulačních diagramů)
znamená, že se analýza musí pozastavit, metodu a postup stanovení je nutné
prověřit a po odstranění eventuálně zjištěné závady analýzu zopakovat.
Součástí kontroly a
řízení jakosti by měla být pravidelná účast na mezilaboratorních kontrolách
kvality organizovaných ve vhodných intervalech například firmou SEKK.
Poznámky, zdroje variability
Jiné související informace
Literatura
-
Ambre, J., Fischman, M., Ruo, T.: Urinary excretion
of ecgonine methyl ester, a major metabolite of cocaine in humans. J. Anal.
Tox. 1984, 8, s. 23-5.
-
Hawks, RL., Analytical Methodology. In.: Chiang,
CN., Hawks, RL. eds. Urine testing for drugs of abuse. National Institute on
Drug Abuse (NIDA). Research Monograph 73. Rockville, MD: Department of Health and
Human Services, 1986, 35-8.
-
Baselt, RC.: Urine drug screening by immunoassay:
Interpretation of results. In: Baselt, RC.,ed. Advanced in analytical
toxicology. Foster City, CA: Biomedical Publications, 1984, 1, 81-123.
Appendixy
Parametry
testu Abbott AxSYM Cocaine Metabolite 3B24-20:
(Obsluhou
editovatelné parametry jsou označené symbolem >)
1 Celý název metody (anglicky) : Cocaine_Met
6 Zkrácený název metody: Cocaine
11 Číslo metody: 500
12 Verze metody: 1
13 Verze kalibrace: 00
14 Metoda dostupná: > ON /OFF
17 Princip: FPIA
18 Počet opakování měření standardů při celé kalibraci: > 2
19 Počet opakování měření standardů při zkrácené kalibraci > 2
21 Konc. kalibrátoru A: 0,00
22 Konc. kalibrátoru B: 300,00
23 Konc. kalibrátoru C: 1000,00
24 Konc. kalibrátoru D: 2000,00
25 Konc. kalibrátoru E: 3000,00
26 Konc. kalibrátoru F: 5000,00
27 Konc. kalibrátoru 1 v zkrácené kalibraci: 0,00
28 Konc. kalibrátoru 2 v zkrácené kalibraci: 300,00
43 Doporučené ředění vzorku > UNDILUTED
44 Doporučený typ kalibrace: > Standard Cal
45 Jednotky : > µg/l (μmol/l)
46 Počet desetinných míst> 2
75 Spodní hranice extrémního výsledku: > 0,00
76 Horní hranice extrémního výsledku: > 0,00
92 Horní hranice pro měření v neředěném vzorku: > 5000
116 Pozitivní hranice cut-off: > 300,00
117 Negativní hranice cut-off: > 300,00
Autorské poznámky
Recenze, schválení
Autor a spoluautoři: ing. Václav Senft
Recenze:
Vyjádření:
Revize: