Abstrakt
Principem je kombinace analytické elektroforetické
metody založené na rozdílné pohyblivosti látek v elektrickém poli s
imunodifuzní metodou založenou na specifické imunochemické reakci mezi
antigenem a protilátkou.
Související informace
Elektroforéza v
polyakrylamidovém gelu
Elektroforéza v agarózovém
gelu
Elektroforéza na
acetylcelulóze
Text je členěn do odstavců:
A.
Kvalitativní
imunoelektroforetické metody
1.
Imunoelektroforéza
2.
Protisměrná
elektroforéza
B.
Kvantitativní
imunoelektroforetické metody
1.
Elektroimunodifuze
podle Laurella (raketková)
2.
Dvourozměrná
imunoelektroforéza
Text
Imunoelektroforetické metody se dle způsobu vyhodnocení
dělí na:
A.
Kvalitativní
B.
Kvantitativní
A.-1. Imunoelektroforéza
Imunoelektroforéza je kombinací elektroforetického
dělení s imunodifuzním.
Metoda má dvě fáze:
|
|
a)
Rozdělení
sledované látky (séra) elektroforézou na gelu, po ukončení se gel nesuší ani
nebarví, ale následuje druhá fáze. b)
Vedle
rozdělených složek se do gelové vrstvy vykrojí úzký žlábek, do něj se
pipetuje protilátka (antisérum), následuje inkubace. Mezi antigenem
jednotlivých složek a protilátkou se vytvoří precipitační linie, které se
zvýrazní obarvením. |
A.-2. Protisměrná elektroforéza
Protisměrná elektroforéza využívá opačný pohyb antigenu
a protilátky v elektrickém poli. Je to imunodifuze za pomoci elektrického
proudu, čímž se imunodifuzní reakce značně zrychlí.
|
Antigen (1) a protilátka (2) se umístí do dvou proti
sobě položených startovacích jamek v gelu tak, aby protilátka byla blíže k
anodě a antigen ke katodě. V elektrickém poli se antigen pohybuje k anodě a
protilátka naopak ke katodě, v místě jejich setkání se vytvoří precipitační
linie, které se zvýrazňují barvením. |
|
B.-1. Elektroimunodifuze podle Laurella (raketková)
Jedná se o jednoduchou imunodifuzní techniku probíhající
v elektrickém poli. Vznikají precipitáty ve tvaru rakety, výška raketky je přímo
úměrná koncentraci antigenu.
|
|
B.-2. Dvourozměrná imunoelektroforéza
Tato technika je kombinací elektroforézy a raketkové
imunoelektroforézy. Postup má dvě fáze:
a)
Gelovou
elektroforézou se rozdělí směs antigenů.
b)
Odříznutý
proužek gelové vrstvy s rozdělenými antigeny se přenese na novou desku, plocha
se doplní gelem s protilátkou. dalším elektroforetickým dělením se vytvoří
široké precipitační linie.
Autorské poznámky
Jaroslava Vávrová