Abstrakt
Na imunochemickém principu založený test, např. ULTIMED MULTIDrugControl
Card (10) umožňuje rychlé screeningové prověření eventuelní
přítomnosti 10 skupin drog a zneužívaných látek v moči (Amfetaminy,
Metamfetaminy, Barbituráty, Benzodiazepiny, Buprenorfin, Kanabinoidy, Kokain,
Metadon, Opiáty, Tricyklická antidepresiva a MDMA-Extáze). Test je sice pouze
kvalitativní, takže výsledky se vydávají jen ve tvaru pozitivní nebo negativní,
ale je velmi cenný při akutních klinických případech pro rychlost získání
relevantních informací o pacientovi. Pro eventuelní soudní účely je nutné
případný pozitivní nález prověřit nezávislou kvantitativní metodou, např.
GC/MS, HPLC apod.
Cenná je možnost současného prověřování pokusů o znehodnocení vyšetřované moči
prověřovanou osobou a to semikvantitativním stanovením kreatininu, specifické
hmotnosti, redukujících (dusitany) a oxidujících (bělidla, desinfekce) látek, a
hodnoty pH.
Výčet analytů (entit)
|
Látka v moči |
Zkratka |
|
Amfetamin |
AMP |
|
Barbituráty |
BAR |
|
Benzodiazepiny |
BZO |
|
Buprenorfin |
BUP |
|
Extáze |
MDMA |
|
Kanabinoidy |
THC |
|
Kokain |
COC |
|
Methadon |
MTD |
|
Metamfetamin |
MET |
|
Opiáty |
OPI |
|
Tricyklická antidepresiva |
TCA |
Seznam souvisejících dokumentů
Kódy a názvy v různých klasifikačních systémech
Národní číselník laboratorních položek:
08229 Benzodiazepiny (U; látková konc. [ µmol/l] *)
11525 Benzodiazepiny (U; přítomnost [ -] *)
15126 Buprenorfin (průkaz) (U; přítomnost [ -] *)
04898 Amfetamin (U; látková konc. [ µmol/l] *)
11449 Amfetamin (průkaz) (U; přítomnost [ -] *)
09554 Metamfetamin (U; látková konc. [ µmol/l] *)
11576 Metamfetamin (průkaz) (U; přítomnost [ -] *)
07165 Barbituráty (U; látková konc. [ µmol/l] *)
11523 Barbituráty (průkaz) (U; přítomnost [ -] *)
08229 Benzodiazepiny (U; látková konc. [ µmol/l] *)
11525 Benzodiazepiny (průkaz) (U; přítomnost [ -] *)
08497 Kanabinoidy (U; látková konc. [ µmol/l] *)
08495 Kanabinoidy (průkaz) (U; přítomnost [ -] *)
04976 Kokain (U; látková konc. [ µmol/l] *)
11540 Kokain (průkaz) (U; přítomnost [ -] *)
11578 Metadon (průkaz) (U; přítomnost [ -] *)
08903 Opiáty (U; látková konc. [ µmol/l] *)
11584 Opiáty (průkaz) (U; přítomnost [ -] *)
09065 Tricyklická antidepresiva (U; látková konc. [ µmol/l] *)
11616 Tricyklická antidepresiva (průkaz) (U; přítomnost [ -] *)
Extáze (MDMA)
Laboratorní informační systém STAPRO:
Globální kód: 0671 Barbituráty kvalitativně v moči
6242 Barbituráty semikvantitativně v moči
6241 Barbituráty v moči
0954 Benzodiazepiny v moči
1696 Kanabinoidy v moči
1697 Kokain v moči
4335 Metadon v moči
1703 Opiáty v moči
1695 Tricyklická antidepresiva v moči
- Extáze v moči
- Buprenorfin v moči
Seznam zdravotních výkonů VZP:
99151 Psychotropní látky jednotlivě. (427 bodů)
92135 Drogy a léčiva – cílený imunochemický záchyt –STAT (492 bodů)
92133 Drogy a léčiva – cílený imunochemický záchyt. (406 bodů)
Princip
Test prokazuje přítomnost jednak nezmetabolizovaných drog, jednak jejich metabolitů. Konjugáty (drug-conjugate) přítomné v membráně testovací destičky soutěží kompetitivně s látkami přítomnými v testované moči o možnost navázaní se na omezené množství protilátek nanesených na začátek testovací membrány. Barevné protilátky (anti-drug monoclonal antibody) jsou spolu s močí posunovány po membráně. Pokud v moči drogy nejsou, dostanou se nenavázané protilátky až k pásu konjugátů v oblasti označené písmenem T (Test region) a vytvoří zde barevný pruh, což znamená negativní výsledek testu. Pokud v moči drogy jsou přítomné, navážou se na ně protilátky hned na počátku membrány a k pásu konjugátů se již jako volné nedostanou. V oblasti označené písmenem T proto žádný barevný pás nevznikne, což znamená pozitivní výsledek testu. Podmínkou vydání výsledku testu (pozitivní nebo negativní) je přítomnost barevného kontrolního pruhu v oblasti membrány označené písmenem C (Control region). Ten vytvoří reakce jiného systému antigen/protilátka přidávaného výrobcem do setu. Kontrolní barevný pruh potvrzuje, že test byl proveden správně a že je funkční, tj. že bylo na testovací destičku naneseno dostatečné množství moče a že se moč dobře nasákla do celé plochy testovací membrány.
Definice a terminologie
MULTIDrugControl Card (10) je diagnostický test určený pro kvalitativní průkaz drog a jejich metabolitů v moči (Amfetaminy, Metamfetaminy, Barbituráty, Benzodiazepiny, Kanabinoidy, Kokain, Metadon, Opiáty, Tricyklická antidepresiva a MDMA-Extáze).
MULTIDrug Control Advanced + (5) je diagnostický test, který mimo kvalitativní průkaz droga jejich metabolitů v moči (Benzodiazepiny, Buprenorfin, Metamfetamin, Opiáty a Kanabinoidy) současně umožňuje prověřit eventuální pokusy o znehodnocení vyšetřované moče prověřovanou osobou a to a to současným semikvantitativním stanovením kreatininu, specifické hmotnosti, redukujících (dusitany) a oxidujících (bělidla, desinfekce) látek, a hodnoty pH.
Výrobcem setu je ULTIMED Products (Deutschland) GmbH, Reeshoop 1, 22926 Ahrensburg, www.ultimed.org
Dodavatelem setu je JK Trading s. r. o., Za Opravnou 5, Praha 5, tel. 257 220 760,
Katalogové číslo:
- setu MULTIDrugControl Card (10) je 008A410
- setu MULTIDrug Control Advanced + (5) je 008A460
Pozn.: K dispozici je řada typů MULTI testů pro 3, 5, 6 nebo 10 drog
i SINGLE
testů.
Místo provádění postupu
Ústav klinické biochemie a hematologie Fakultní nemocnice Plzeň a Lékařské fakulty University Karlovy Plzeň, Alej Svobody 80, 304 60 Plzeň.
Bezpečnostní aspekty a podmínky prostředí
Při stanovení je nutné, vedle obecných zásad bezpečnosti práce, viz Směrnice o bezpečnosti práce zachovávat především zásady bezpečné práce s potenciálně infekčním materiálem. Viz:
Směrnice pro práci s biologickým materiálem
Směrnice pro likvidaci biologického materiálu
Dezinfekce, sterilizace
Teorie, použití, preanalytické požadavky
Testy ULTIMED jsou určeny pro rychlý screeningový průkaz některé
z testovaných látek ve vyšetřované moči. Pozitivní nález je ale
využitelný jen jako rychlý údaj užitečný například při akutní klinické situaci,
vyžadující rychlé rozhodování kvůli špatnému zdravotnímu stavu pacienta. Pro
soudní a podobné účely se musí pozitivní nález potvrdit nezávislou
kvantitativní, specifickou metodou jakou je například plynová chromatografie
(GC/MS), případně vysokotlaká kapalinová chromatografie (HPLC) apod.
Velmi často je tento rychlý screeningový průkaz prakticky znemožněn
v důsledku pokusů „zkušených“ prověřovaných osob o ovlivnění výsledku
přídavkem různých znehodnocujících (Adulteration) látek (kyselé, zásadité,
redukující či oxidující látky) nebo alespoň naředěním moče vodou. Proto je
velmi cenná možnost současně otestovat přítomnost těchto znehodnocujících látek
(pH, dusitany (Ni), bělící/oxidující látky (Bl) ) či naředění moče (kreatinin
(Cr), specifická hmotnost (SG) ) pomocí současně probíhajících přídavných
testů, kde dochází ke změně zabarvení příslušných chemických indikátorů
v závislosti na koncentraci látek.
Nasazením těchto přídavných testů se relevantnost screeningového průkazu drog či jejich metabolitů v moči zcela zásadním způsobem zvýší.
Metamfetamin i amfetamin patří do skupiny látek (derivátů fenyletylaminu), které stimulují CNS, protože chemicky i farmakologicky odpovídají přirozeným katecholaminům lidského těla, norepinefrinu a dopaminu.
Do této skupiny patří například i MDMA (tj. extáze) a efedrin. Vyskytují se v různě účinných formách d- a l-stereoizomerů.
Jsou absorbovány v GIT a rychle přecházejí do krevního oběhu. Metabolizovány jsou v játrech deaminací, oxidací a hydroxylací až na kyselinu hipurovou.
Značná část amfetaminu je vylučována močí v nezměněné formě spolu s metabolity. Vzájemný poměr závisí na pH moči. Během prvních 24 hodin po požití se vyloučí u zdravých osob cca 70% dávky (z toho asi 30% v nezměněné podobě, 16-28% metabolizováno na kyselinu hipurovou, 2% jako norefedrin), v alkalické moči se ale vyloučené množství sníží až na 1% dávky. Převážná část (cca 90%) podané látky odejde z organizmu během 3-4 dnů.
Během prvních 24 hodin po požití se vyloučí u zdravých osob cca 43% dávky metamfetaminu v nezměněné podobě, 4-7% je metabolizováno na amfetamin. V alkalické moči se ale vyloučené množství sníží až na 2% dávky.
Biologický poločas obou látek se pohybuje kolem 10 hodin.
Barbituráty jsou deriváty kyseliny barbiturové a patří mezi nejužívanější hypnotika v lékařství. Při vhodné léčebné dávce navodí normální spánek, ale ve vysokých dávkách působí toxicky.
Používá se kolem 20 derivátů kyseliny barbiturové, které se liší různými substituenty R1 a R2 na uhlíkovém atomu číslo 5 v kruhu: Například barbital (5,5-dietyl-), phenobarbital (5-fenyl-5-etyl-), allobarbital (5,5-dialyl-), hexobarbital (1,5-dimetyl-5-(1-cyklohexenyl)-), atd.
Poměrně často dochází k intoxikacím z různých důvodů: náhodná záměna, sebevražedný úmysl, předávkování při terapii, návykové zneužívání apod. Pro možnost zvolit adekvátní terapii je pro klinika důležitá možnost třeba jen kvalitativního (semikvantitativního), ale hlavně rychlého průkazu přítomnosti barbiturátů. Právě pro tyto akutní případy intoxikací je určen tento rychlý kvalitativní test na barbituráty v moči. Není proto vhodný pro soudně lékařské a forenzní potřeby, pro které by musel být výsledek testu potvrzen vhodnou kvantitativní a specifickou metodou založenou například na principu plynové chromatografie kombinované s hmotovou spektrometrií (GC/MS).
Provedení testu nemá zvláštní preanalytické požadavky ani nevyžaduje předúpravu vzorků močí.
Benzodiazepiny představují skupinu často používaných léků tlumících činnost CNS vazbou na GABA (gama-aminobutyric acid) receptory. Jsou často aplikovány jako anxiolytika, sedativa, myorelaxancia, antikonvulziva, preanestetika, antiepileptika apod. Při dlouhodobém a nadměrném užívání se může vyskytnout návyk a závislost spojená s nutností zvyšování aplikovaných dávek. Po náhlém vysazení léčby se mohou objevit i akutní abstinenční příznaky (křeče, anorexie, svalová ochablost, zvracení, průjem). Riziko vzniku závislosti a tím i zneužívání je ale u benzodiazepinů relativně malé. Vzhledem k masovému používání jsou však relativně časté intoxikace způsobené předávkováním a potencované někdy současným působením jiných léků nebo alkoholu. Otrava se projevuje ospalostí, komolením řeči, poruchou koordinace a případně až komatem. Vážnější poruchy respiračního a kardiálního systému se objevují jen vzácně.
Benzodiazepiny se většinou aplikují orálně. Lipofilní benzodiazepiny (např. diazepam, flurazepam) se absorbují rychle, peak v séru se objeví již za méně než půl hodiny. Jiné, méně lipofilní (oxazepam), se absorbují pomaleji s maximální koncentrací v séru až za 2-3 hodiny po aplikaci. Po absorpci v GIT jsou benzodiazepiny rychle distribuovány do CNS. Následuje již mnohem pomalejší redistribuce z CNS do tukových tkání a svalů. Rychlost této redistribuce určuje (spolu s účinností jaterní metabolizace), jak dlouho přetrvávají účinky podaného léku (např. u diazepamu je t1/2 30-56 hodin, u oxazepamu jen 5-15 hodin).
t1/2 částečně určuje, pro jakou klinickou aplikaci se konkrétní typ benzodiazepinu použije. Pro preanestetické uklidnění se volí krátký, pro léčbu úzkosti středné dlouhý a jako antikonvulzívum dlouhý t1/2.
Z benzodiazepinů vzniká v játrech oxidací a konjugací řada často farmakologicky aktivních metabolitů, které se nakonec vylučují močí převážně ve formě glukuronidů.
Benzodiazepiny mohou být kvantifikovány v séru např. metodou HPLC, ale tento údaj není příliš významný, protože koncentrace v séru nekoreluje s závažností intoxikace. Velmi užitečný a často indikovaný je ale imunochemický screeningový test umožňující semikvantitativní průkaz přítomnosti významného množství benzodiazepinů či jejich metabolitů v séru nebo v moči u pacientů s neznámou příčinou akutního utlumení CNS.
Kokain je alkaloid izolovaný z rostliny Erythroxylon coca, což je keř, který původně rostl ve vyšších nadmořských výškách jihoamerických And, ale nyní se pěstuje i v Indii, Africe a Indonesii. Z cca 100 kg listů koky se vyrobí cca 1,8 kg pasty sloužící k výrobě kokain hydrochloridu. S kokainem se „obchoduje“ ve dvou formách: 1. prášek kokain hydrochloridu pro aplikaci na nosní sliznici a 2. volná báze kokainu (crack), která se inhaluje kouřením a působí zvlášť rychle. Orální aplikace je neúčinná pro rozklad kokainu v GIT. Kokain (methylbenzoylekgonin) je ester kyseliny benzoové a aminoalkoholu methylekgoninu. Hydrofobní část molekuly obsahuje benzenové jádro, hydrofilní má strukturu terciálního aminu.
Kokain se rychle metabolizuje hydrolýzou esterových vazeb, především na benzoylekgonin a ekgonin methyl ester. Obě tyto látky dále přechází na ekgonin. Kokain i jeho metabolity, které jsou rozpustnější ve vodě než původní droga, jsou převážně vylučovány močí (již během prvního dne se vyloučí cca 86% podané dávky). Kokain a jeho metabolity v moči se stanovují různými technikami (imunoanalýza, chromatografie). Imuno testy jsou cílené především na benzoylekgonin, jako hlavní močový marker užívání kokainu, ale vykazují křížovou reakci i s kokainem aj.
Kokain má i léčebné využití, například jako lokální anestetikum, ale v současnosti patří kokain mezi nejčastěji zneužívané drogy. Kokain totiž způsobuje pocit euforie, sebedůvěry a zvýšené energie i když jen krátkodobě. Tyto psychologické účinky doprovází zvýšená srdeční frekvence, rozšíření zornic, horečka, třes a pocení. Velmi nepříjemné jsou jevy doprovázející odeznívání aplikované dávky: deprese, popudlivost, malátnost, úzkost, halucinace až paranoia. Při chronickém užívání dochází ke snížení paměti, a schopnosti se koncentrovat, objevuje se stihomam a konečným důsledkem bývají poruchy mezilidských vztahů, selhání v zaměstnání, chudoba a tlak ke kriminálnímu jednání ve snaze získat další drogu. Snadno přitom dochází k přechodu na jiné drogy.
Opiáty. Ve šťávě (opium) z nezralých makovic Papaver somniferum se nachází víc než 25 různých alkaloidů. Vedle isochinolinových alkaloidů (např. papaverin) zaujímají významné místo alkaloidy, základem jejichž chemické struktury je fenantrénové jádro. Jsou to morfin (cca 10%) a kodein (cca 0,5%). Z těchto přírodních opiátů se připravuje celá řada polosyntetických opiátů, ve kterých je zachováno fenantrénové jádro při substituci bočních radikálů. Například acetylací hydroxylových skupin C3 a C6 vzniká heroin, oxidací hydroxylové skupiny C6 na keto skupinu a saturací dvojné vazby C7-C8 se získá hydromorfon, následující hydroxylací na C14 se vytvoří oxykodon apod.
Nejčastěji
se opiáty aplikují intravenózně nebo podkožně, ale používá se i kouření a
šňupání. Distribuce opiátů v organismu záleží nejen na způsobu aplikace,
ale i chemických a fyziologických faktorech konkrétní látky. Opiáty se
koncentrují v orgánech jako jsou plíce, mozek, ledviny, slinivka a
játra.
Opiáty (morfin, kodein a heroin) se rychle (např. biologický poločas morfinu je
1,3-6,7 hodin) metabolizují redukcí a oxidací, N- i O- dealkylací, hydroxylací
a konjugací. Vznikají vesměs metabolity, které jsou více rozpustné ve vodě.
Některé metabolity jsou farmakologicky aktivní (někdy jsou analgetické účinky
silnější než u výchozí látky), některé jsou farmakologicky neaktivní. Většina
opiátů i jejich metabolitů se vylučuje močí ve formě glukuronidů. Např. heroin
se rychle hydrolyzuje na 6-monoacetylmorfin, který přechází na morfin vylučovaný
močí ve vazbě na glukuronidy. Obdobně se na morfin metabolizuje asi 10%
kodeinu.
Opiáty se po staletí používají jako lék k zmírnění silných bolestí (narkotická analgetika). Součástí účinku je i pocit euforie, potlačení strachu či úzkosti a snížení citlivosti na fyziologické i psychologické podněty. Tyto pocity vedou často k zneužívání. Užívání opiátů ale provází vznik silné fyziologické závislosti. Abstinenční symptomy obvykle nastupují za 6-8 hodin po poslední dávce a mohou přetrvávat řadu dní. Závislý člověk je potom nucen vyhledávat další a další dávky drogy, často i za cenu kriminálních činů.
Metadon je syntetické analgetikum, které se svými účinky podobá morfinu. Aplikuje se především jako substituční droga pacientům prodělávajícím odvykací léčení ze závislosti na heroinu. Aplikace metadonu má totiž mnohem menší negativní dopady na zdraví pacienta, než opiáty.
Metadon se aplikuje orálně v tabletách á 5,10 a 40 mg, nebo parenterálně v roztoku o koncentraci 10 g/l.
Pacienty na metadonové terapii je nutné v pravidelných intervalech monitorovat, tj. stanovovat koncentraci metadonu v moči. Kontrola je nutná jednak aby se na jedné straně předešlo předávkování metadonem (nastupují potom negativní efekty, jako jsou deprese CNS a respiračního systému, hypotenze, kolaps krevního oběhu, kóma, plicní edém, hypotermie, aj.), jednak aby byla jistota, že pacient metadon užívá v předepsaných dávkách a intervalech (cca 20-120 mg/den).
Metadon se metabolizuje nejdříve N-demetylací, následovanou spontánní cyklizací, při které vznikají dva farmakologicky inaktivní pyrrolidiny. Hydroxylací metadonu vzniká také metadol a jeho N-demetylací normetadol.
Extáze. 3,4-methylendioxy-N-methamfetamin (MDMA) je syntetická psychoaktivní droga podobná metamfetaminu ale s většími halucinogenními účinky. Ačkoliv byla syntetizována již počátkem dvacátého století, až do osmdesátých let nebylo známé její zneužívání. Až v roce 1985 byla zařazena v USA do seznamu látek s vysokým rizikem návykového zneužívání a od té doby se její zneužívání velmi rozšířilo.
Po požití běžné tablety (80-150 mg) se 65 % MDMA vylučuje nezměněno močí. 7 % je demetylováno a vylučuje se močí jako metyledioxyamfetamin (MDA). Ostatní metabolity zahrnují konjugované mono a di-hydroxy deriváty MDMA i MDA. MDMA je detekovatelné v moči až 3 dny po použití.
Tricyklická antidepresiva. Jednou z nejčastějších chorob jsou deprese. K jejich léčení se široce používají tricyklická antidepresiva jako je imipramin, desipramin, amitriptylin a nortriptylin. Poměrně často se ale vyskytuje předávkování způsobující intoxikaci tricyklickými antidepresivy spojenou s různými symptomy a projevy. Detekce v moči je užitečná pro potvrzení diagnózy a pro výběr odpovídajícího léčení.
Jako kanabinoidy se označuje skupina látek obsahujících 21 atomů uhlíku, která se vyskytuje v nápadné 2-3 metry vysoké rostlině Cannabis sativa, známé jako konopí. Hlavní psychoaktivní látkou této skupiny je Δ9-tetrahydrokanabinol (THC), který navozuje pocit euforie, uvolnění a relaxace, ale také vyvolává časovou dezintegraci, ovlivňuje reakční čas, vybavování si z trvalé paměti, atd. Tento efekt nastupuje již několik minut po vykouření cigarety s marihuanou. Maximálního účinku se dosahuje za 15-30 minut a přetrvává po dobu 2-4 hodin. Po inhalaci se kouř rychle absorbuje v plicích a v krvi je možné zachytit několika minutový peak THC. Potom dochází k rychlému poklesu koncentrace THC v krvi v důsledku distribuce THC do mozku, tukových a svalových tkání. V další fázi dochází k pomalé redistribuci THC do krve a metabolizaci v játrech:
Δ9-THC ==> 11-OH- Δ9-THC ==> 11-nor- Δ9-THC-9-karboxylová kyselina
Tento hlavní metabolit vylučovaný močí a stolicí (11-nor- Δ9-THC-9-karboxylová kyselina) již nemá psychoaktivní účinky. Biologický poločas eliminace THC je od cca 1 dne u příležitostných kuřáků, až po 3-5 dnů u chronických uživatelů. U zvlášť těžkých kuřáků je možné detekovat metabolity THC i měsíc po poslední aplikaci.
Přírodní kanabinoidy a jejich metabolity jsou rozpustné v tucích a proto jsou v lidském organizmu kumulovány v tukových tkáních ještě dlouho po expozici.
Konopí se užívá v různých formách od kouření sušených horních listů samičí rostliny, až po hašiš, což je pryskyřice extrahovaná z rostliny do tuků.
Buprenorfin je polosyntetický derivát jednoho z alkaloidů opia – thebainu. Je složkou řady léků (nejznámější z nich je SUBUTEX) využívaných především k analgesii (léčbě bolesti) a k substituční a detoxifikační léčbě při závislosti na opioidech. Bohužel často dochází k zneužívání buprenorfinu jako drogy, protože má podobné účinky jako heroin, morfin a jiné opioidy. Jedná se tedy nejen o lék, ale i o návykovou látku, i když její pravidelné užívání je méně rizikové než užívání heroinu.
Znaky analytických metod
Správnost a specifičnost výsledků testu byla výrobci prověřena současnou analýzou vzorků principem GC/MS:
|
Testované látky |
Cut off (µg/l) |
% shody testu s GC/MS při cut off |
% shody s GC/MS při konc. 50% pod a 50% nad cut off |
|
Amfetamin |
1000 |
95 |
> 99 |
|
Barbituráty |
300 |
95 |
100 |
|
Benzodiazepiny |
300 |
96 |
100 |
|
Buprenorfin |
10 |
95 |
> 99 |
|
Extáze |
500 |
99 |
100 |
|
Kokain |
300 |
93 |
100 |
|
Metadon |
300 |
96 |
> 99 |
|
Metamfetamin |
1000 |
96 |
> 99 |
|
Opiáty |
2000 |
95 |
> 99 |
|
TCA |
1000 |
95,7 |
> 99 |
|
THC |
50 |
92 |
100 |
Z toho, že nebyla vždy stoprocentní shoda jednoznačně plyne, že test Ultimed je možné využívat pouze jako kvalitativní orientační test nepoužitelný přímo například pro soudní účely. Pro ty je nutné případné pozitivní výsledky validovat pomocí jiné nezávislé kvantitativní a specifické metody. Kvalitativní výsledek screeningového testu Ultimed má však velký význam při akutních klinických případech především vzhledem k rychlosti získání výsledku.
Přesnost byla výrobci prověřena následujícím způsobem:
Byla připraveny vzorky močí s koncentracemi drogy vždy 50 a 25% pod cut off a 25 a 50% nad cut off.
Tyto vzorky byly otestovány netrénovanými pracovníky ve třech různých zdravotnických zařízeních a to třemi různými šaržemi MULTIDrugControl Card (10) firmy ULTIMED.
Vyhodnocená opakovatelnost, reprodukovatelnost i vliv operátora byla ve všech případech vyhovující.
Koncentrace (cut off) při kterých byl výsledek testu vyhodnocen jako pozitivní:
|
Test |
Substance |
Cut off (μg/l) |
|
Amfetamin (AMP) |
D-amfetamin |
1000 |
|
|
3,4-metylendioxyamfetamin |
2000 |
|
|
D,L-amfetamin |
3000 |
|
|
L-amfetamin |
50000 |
|
Barbituráty (BAR) |
Butabarbital |
75 |
|
|
Phenoarbital |
100 |
|
|
Aprobarbital |
200 |
|
|
Amobarbital |
300 |
|
|
Secobarbital |
300 |
|
|
Pentobarbital |
300 |
|
|
Cyklopentobarbital |
600 |
|
|
Butalbital |
2500 |
|
Benzodiazepiny (BZD) |
Nitrazepam |
100 |
|
|
Temazepam |
100 |
|
|
Lorazepam glukuronid |
150 |
|
|
Alprazolam |
200 |
|
|
Diazepam |
200 |
|
|
Oxazepam |
300 |
|
|
Flunitrazepam |
400 |
|
|
Nordiazepam |
400 |
|
|
Clonazepam |
800 |
|
|
Bromazepam |
1500 |
|
|
Chlordiazepoxid |
1500 |
|
|
Lorazepam |
1500 |
|
|
Estazolam |
2500 |
|
|
Triazolam |
2500 |
|
|
Midazolam |
12500 |
|
Buprenorfin (BUP) |
Buprenorfin |
10 |
|
Kokain (COC) |
Benzoylecgonin |
300 |
|
|
Kokain |
700 |
|
|
Ecgonin |
32000 |
|
Metamfetamin (MET) |
D-metamfetamin |
1000 |
|
|
3,4-methylendioxymetamfetamin |
2000 |
|
|
L-metamfetamin |
8000 |
|
|
p-hydroxymetamfetamin |
30000 |
|
Opiáty (MOR) |
Morfin |
300 |
|
|
Kodein |
300 |
|
|
6-monoacetylmorfin |
400 |
|
|
Hydromorfon |
3000 |
|
|
Ethylmorfin |
6000 |
|
|
Norkodein |
6000 |
|
|
Thebain |
6000 |
|
|
Oxycodon |
30000 |
|
|
Hydrocodon |
50000 |
|
Metadon (MTD) |
Metadon |
300 |
|
|
Doxylamin |
50000 |
|
Extáze (MDMA) |
3,4-methylendioxyethylamfetamin |
300 |
|
|
3,4-methylendioxymetamfetamin |
500 |
|
|
3,4-methylendioxyamfetamin |
3000 |
|
Tricyklická antidepresiva (TCA) |
Desipramin |
200 |
|
|
Imipramin |
400 |
|
|
Nordoxepin |
1000 |
|
|
Nortryptilin |
1000 |
|
|
Amitryptilin |
1500 |
|
|
Promazin |
1500 |
|
|
Doxepin |
2000 |
|
|
Maprotilin |
2000 |
|
|
Trimipramin |
3000 |
|
|
Clomipramin |
12500 |
|
|
Promethazin |
25000 |
|
Tetrahydrokanabinoidy (THC) |
11-nor-Δ9-THC-9-COOH |
30 |
|
|
Δ9-THC |
15000 |
|
|
Kanabinol |
20000 |
Výrobci dále prověřili několik set látek na zkříženou reaktivitu. Přehled těchto látek pro všechny testované skupiny drog ale přesahuje rozsah tohoto SOPV. Je dostupný na vyžádání u výrobce testu.
Odběr materiálu
Potřebné množství moče se odebere do čisté a suché skleněné nebo plastové zkumavky. Vzorek moči na testování lze odebrat kdykoliv v průběhu dne.
Manipulace s materiálem
Vzorek moče se může uchovávat v ledničce při +2 °C až + 8 °C po dobu dvou dnů. Pro delší skladování je nutné vzorek moče zmrazit na - 20 °C. Před vlastním stanovením je ale nutné nechat vzorky vytemperovat na teplotu + 15 °C až + 25 °C a řádně promíchat. Vzorky močí s velkým obsahem pevných částic je vhodné před testováním odstředit nebo přefiltrovat.
Přístroje a pomůcky
Všechny potřebné pomůcky jsou obsaženy v setu:
MULTIDrugControl Card (10) je oboustranná s pěti testy na každé straně. Do spodní odnímatelné části (vanička) se napipetuje dostatečné množství vzorku testované moče a ponoří se do ní testovací proužky vyčnívající z horní části. Musí se přitom dát pozor, aby se horní část testovací destičky nedostala do přímého kontaktu s močí.
MULTIDrug Control Advanced (5) je jednostranná v horní části s pěti
testy na drogy, ve spodní části s pěti testy na eventuální
přítomnost znehodnocujících látek. Testovací políčka těchto testů se přímo
ponořují do moči.
Reagencie
Všechny potřebné reagencie jsou obsaženy v setu :
- Na začátku testovacích proužků je na membráně vždy v omezeném množství příslušná monoklonální protilátka proti hlavním metabolitům amfetaminu/metamfetaminu, barbiturátů, benzodiazepinů, buprenorfinu, kokainu, opiátů, kanabinoidů, tricyklických antidepresiv, metadonu a MDMA-extáze.
- V oblasti testovacích proužků označené písmenem T jsou imobilizované příslušné proteinové konjugáty se kterými volné protilátky vytváří barevný proužek (pouze při nepřítomnosti drogy ve vzorku moče).
- V kontrolní oblasti testovacích proužků označené písmenem C jsou kozí-anti myší protilátky vytvářející barevný kontrolní proužek v případě, že je test funkční a bylo správně aplikováno dostatečné množství moče.
- Kontrolní políčka pro prověření přítomnosti znehodnocujících látek obsahují chemické indikátory měnící zabarvení v závislosti na koncentraci testovaných látek nebo na změně pH.
Spotřební materiál
Plastové špičky k pipetě.
Kalibrace
Kalibrace se neprovádí, protože screeningový test je pouze kvalitativní,
tj. pozitivní výsledek znamená, že koncentrace dané drogy (metabolitu)
v testovaném vzorku je stejná nebo vyšší, než koncentrace cut off, zatímco
negativní výsledek znamená, že daná droga v testovaném vzorku buď vůbec
není, nebo je v koncentraci nižší, než jsou koncentrace cut off.
Přítomnost znehodnocujících látek se semikvantitativně vyhodnocuje pomocí
přiložené barevné tabulky:
Pozn.: Nitrite (Ni) = dusitany, resp. redukující látky, Bleach (Bl) = bělící,
resp. oxidující látky
Pracovní postup
1- Před testováním nechat vzorek moče vytemperovat na teplotu laboratoře (15-25 ºC).
2- Vyjmout testovací destičku z zataveného ochranného obalu.
3- Sejmout spodní část testovací destičky (vanička) a umístit ji do vhodného stojánku.
4- Napipetovat (opatrně nalít) do vaničky dostatečné množství moče (cca 5 mm od horního okraje).
5- Ponořit pomalu do vzorku moče ve vaničce testovací proužky (svisle).
Přitom u MULTIDrugControl Card
(10) dbát, aby horní část testovací destičky nepřišla do
přímého kontaktu s vzorkem moče, zatímco u
MULTIDrug Control Advanced (5) se spodek horní části
do moče přímo ponořuje.
6- Jakmile vzorek moče nasákne přes celou plochu detekčních okének, testovací
proužky se vyjmou
z vzorku moče .
7- V rozmezí 5-8 minut se odečte výsledek u jednotlivých detekčních
okének na drogy (pozitivní-negativní).
Výsledek testů na přítomnost znehodnocujících látek se
odečítá v časech uvedených ve vyhodnocovací
tabulce (pH bezprostředně, ostatní po 45 – 60 sekundách).
Dokumentace, zpracování a hodnocení dat
- Výsledek testu je pozitivní, když se neobjeví barevný proužek u pozice označené písmenem T, tj. Test. Podmínkou správného provedení a funkčnosti testu je současný barevný proužek v kontrolní pozici označené písmenem C, tj. Control. Pozitivní výsledek testu znamená, že v moči je označená látka přítomná v koncentraci stejné nebo vyšší než je koncentrace (cut off).
- Výsledek testu je negativní, když se objeví barevný proužek
v detekčním poli u pozice označené písmenem T. Znamená to, že
v testovaném vzorku moči testované látky ve vzorku buď vůbec nejsou, nebo
sice jsou, ale v koncentraci nižší, než jsou koncentrace (cut off).
- Přítomnost znehodnocujících látek se hodnotí srovnáním zabarvení testovacích
políček s barevnou vyhodnocovací tabulkou, viz odstavec Reagencie.
Způsob vydávání výsledků
- Výsledky se vydávají pouze jako negativní nebo pozitivní . Skutečné
koncentrace je nutné v případě potřeby stanovit jinou vhodnou metodou
(GC/MS, HPLC apod.).
- Nález znehodnocujících látek se vydává formou poznámky u vyšetřovaného vzorku
a většinou má za následek opakování odběru vzorku moče za zvýšeného dohledu.
Řízení kvality
Kontrola kvality provedení testu a funkčnosti testovací destičky je zajištěna při každém provedení testu podmínkou vzniku barevného proužku v pozici označené písmenem C. Barevný proužek u této pozice znamená, že test je funkční a byl dobře provedený.
Mimo to se doporučuje v intervalu asi 30 dnů kontrola pomocí
referenčního materiálu obsahujícího definované koncentrace testovaných drog.
Přídavné testy na kreatinin a pH moče lze nezávisle periodicky prověřovat např.
stanovením kreatininu běžným postupem na automatickém biochemickém analyzátoru
či pH na vhodném pH metru.
Klinické údaje
Amfetamin (2-amino-1-fenyl-propan) i jeho metyl derivát Metamfetamin patří mezi stimulancia centrálního nervového systému využívaná pro dosažení lepších výkonů, kvůli dosažení pocitů euforie a agility. Dochází k návyku vyžadujícímu zvyšování frekvence a velikosti dávek. Potom nastupují možná rizika: vysoký krevní tlak, ztráta chuti, ztráta váhy, zvýšená teplota, srdeční poruchy, psychóza.
Barbituráty (deriváty kyseliny barbiturové, jako například barbital (5,5-dietyl-barbiturová kyselina), fenobarbital (5-fenyl-5-etyl-barbiturová kyselina), hexobarbital (1,5-dimetyl-5-(1-cyklohexenyl)-barbiturová kyselina) apod.) patří mezi sedativa využívaná například při bolestech hlavy, zubů, při poruchách spánku apod. Převládá orální aplikace. Vzhledem k rozšířenosti a snadné dostupnosti těchto léčiv dochází často k otravám buď nešťastnou náhodou (záměna, děti apod.), nebo při sebevražedných pokusech. Nebezpečná je kombinace s alkoholem.
Benzodiazepiny patří rovněž mezi široce rozšířená léčiva (například
preparáty Diazepam, Oxazepam) zařazovaná do skupiny psychofarmak. Využívají se
například k odstranění či snížení pocitů úzkosti a strachu nebo při léčení
nespavosti. Při chronické aplikaci vzniká snadno závislost.
Buprenorfin (SUBUTEX) se jednak využívá při substituční terapii, jednak
dochází k jeho zneužívání u osob závislých na opioidech. Negativní
zdravotní následky jsou mírnější než např. u heroinu.
Kanabinoidy nejčastěji zastoupené tetrahydrokanabinolem (6´´-hydroxy-2,5´-trimetyl-4´´-amyl-di-benzo-pyran), což je látka obsažená v indickém konopí Cannabis indica (hašiš), nebo v marihuaně. Nejčastější formou aplikace je kouření cigaret vyrobených z těchto rostlin. Patří mezi stimulancia centrálního nervového systému. Zařazuje se sice mezi tzv. měkké drogy, ale přesto dochází ke vzniku závislosti a s tím souvisejícími riziky (symptomy úzkosti, vznik paranoi, deprese, halucinace, ...).
Kokain je alkaloid (derivát atropinu) získávaný z rostliny Erythroxylon coca pěstované v Jižní Americe. Farmakologicky se využíval například jako lokální anestetikum, ale protože stimuluje a vyvolává euforii patří mezi nejrozšířenější zneužívané drogy. Aplikuje se intravenózně, šňupáním (snuffing) i inhalací par při zahřívání drogy (smoking). Metabolity v moči jsou zachytitelné do 2-3 dnů po aplikaci.
Metadon (6-dimetylamino-4, 4-difenyl-3-heptanon-hydrochlorid) má účinky podobné heroinu, ale méně intenzivní. Používá se při léčbě závislosti na heroinu i jiných opiátech. Aplikuje se orálně nebo intravenózně. Metabolizuje se v játrech, v moči se zachytí metabolity.
Opiáty zahrnují morfin (derivát fenanthrénu ), heroin (diacetylmorfin), kodein (metyl éter morfinu). V přírodní formě se získávají z máku Papaver somniferum , ale jsou vyráběny i synteticky. Používají se především jako bolest tišící léky. Vzniká rychle závislost a dochází k zneužívání těchto látek s veškerými následky (nevolnost, zvracení, ospalost, zúžení zornic, křeče, poruchy dýchání až smrt v bezvědomí).
Tricyklická antidepresiva skupina psychoaktivních léčiv (například preparáty Imipramin, Amitriptylin, Trimipramin) používaných při léčbě depresí i celé řady dalších onemocnění (například poruchy spánku, bolesti hlavy apod.)
Extáze (MDMA) byla dlouho používána při psychoterapii k vyvolání empatogeneze, tj. stavů empatie. Při aplikaci se hroutí komunikační bariery a zesiluje se smyslové vnímání. Zvyšuje se krevní tlak a puls, sucho v ústech, skřípání zubů, nystagmus, nausea. Ve vyšších dávkách (předávkování) jsou příznaky podobné jako u amfetaminů: závratě, hyperkardie, nervozita. Ve vyvolané euforii lze snadno ignorovat příznaky nebezpečné dehydratace nebo přehřátí, vedoucí ke ztrátě vědomí, hospitalizaci, v horších případech k smrti.
Poznámky
Jiné související informace
Literatura
· Moffat, A.C.: Clarke Isolation and Identification of Drugs, Second Edition. The Pharmaceutical Press, London, 1986.
· Wirth, W., Gloxhuber, Ch.: Toxikologie für Ărzte, Naturwissenschaften und Apotheker. 4. durchgesehene Auflage. Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 1985.
· Hawks, R.L., Chiang, C.N.: Urine testing for drugs of abuse. National Institute for Drug Abuse (NIDA), Research Monograph 73, (1986).
· Baselt, R.C.: Disposition of toxic drugs and chemicals in man. 2nd Ed. Biomedical Publ., Davis, CA. (1982) 488.
· Hayat M.A.: Colloidal Gold: Principles, Methods and Applications. In: Hayat, M.A., Ed.: Vol. 1 and 2 (1989)and Vol. 3 (1991), Academic Press, San Diego, CA.
Appendixy
Stručný popis postupu
1- Před testováním nechat vzorek moče vytemperovat na teplotu laboratoře (15-25 ºC).
2- Vyjmout testovací destičku z zataveného ochranného obalu.
3- Sejmout spodní část testovací destičky (vanička) a umístit ji do vhodného stojánku.
4- Napipetovat (opatrně nalít) do vaničky dostatečné množství moče (cca 5 mm od horního okraje).
5- Ponořit pomalu do vzorku moče ve vaničce testovací proužky (svisle).
Přitom u MULTIDrugControl Card
(10) dbát, aby horní část testovací destičky nepřišla do
přímého kontaktu s vzorkem moče, zatímco u
MULTIDrug Control Advanced (5) se spodek horní části
do moče přímo ponořuje.
6- Jakmile vzorek moče nasákne přes celou plochu detekčních okének,
testovací proužky se vyjmou
z vzorku moče .
7- V rozmezí 5-8 minut se odečte výsledek u jednotlivých detekčních
okének na drogy (pozitivní-negativní).
Výsledek testů na přítomnost znehodnocujících látek se
odečítá v časech uvedených ve vyhodnocovací
tabulce (pH bezprostředně, ostatní po 45 – 60 sekundách).
Autorské poznámky
Doporučení, recenze, schválení
Autor: Ing. Václav Senft, aktualizováno 17.12.2008