Abstrakt
Luminoimunoanalýza je analytická metoda, která pomocí
imunochemické reakce umožňuje stanovit koncentraci analytu v biologickém materiálu. K
detekci se využívá měření světelných
kvant vzniklých luminiscencí reakcí indikátoru navázaného na jednu komponentu
imunochemické reakce (protilátku nebo analyt).
Související informace
Text
LIA lze dělit na metody kompetitivní (typ RIA) a
nekompetitivní (typ IRMA). Nekompetitivní metody jsou označovány ILMA - imunoluminometrická analýza.
Látky, které se používají k luminometrické detekci musí i po vazbě na antigen
nebo protilátku
vykazovat luminiscenční vlastnosti. Takovými látkami je např. isoluminol,
estery akridinových barviv, některé diketony a další látky. Luminiscence je časově omezena a
proto je luminiscenční reakce většinou nastartována před detektorem, přidáním některé
substance chemiluminiscenční reakce nebo např. prudkým ohřevem reakční směsi.
Světelná kvanta jsou detekována pomocí fotonásobiče. Výtěžky chemiluminiscenčních
reakcí nebývají vysoké řádu O,1 až 1 % u izoluminolu, u akridinových barviv, u diketonů
jsou vyšší. Detekční limit luminiscenční reakce se pohybuje v attomolech. LIA jsou velmi citlivé metody zejména v uspořádání
ILMA a jsou automatizovatelné.
Poznámky
Za luminoimunoanalytické metody jsou často považovány
EIA s luminometrickou detekcí. Patří sem např. nejznámější bioluminiscenční reakce, ve
které je zapojen enzym luciferáza (svatojánské mušky Photinus pyrolis).
Luciferin je za přítomnosti ATP, Mg, kyslíku při pH=11 pomocí luciferázy přeměňován na
derivát dioxetanonu, který po dekarboxylaci emituje světelné záření. Výtěžek reakce je kolem
90 %.
Velmi často se používá rovněž enzymu peroxidázy, která v
reakci peroxidu vodíku s luminolem, pyrogalolem nebo akridinovými barvivy vykazuje
luminiscenci. Byla objevena řada látek, která
tuto luminiscenci zesilují a prodlužují (až na desítky minut). Takovými
látkami jsou např. luciferin nebo benzthiazoly. Komerčně je tento systém
využíván firmou KODAK - Amerlex, a IMMUNOTECH - LIANA.
Appendixy
Literatura
Zichová,Hušák,Šafarčík: Vyšetřovací metody in vitro v nukleární
medicíně. IPVZ Brno, 1993
Autorské poznámky
Autor: Šafarčík Kristian
Datum
aktualizace: 26. 11. 1998